[发明专利]血清中蔗糖测定方法

权利要求书

1.一种血清中蔗糖测定方法，其特征在于：工具酶及指示酶同在试剂I中，试剂II中仅有蔗糖酶有效成分；其测定方法为：血清中葡萄糖先与试剂Ⅰ于37℃温浴3～5分钟，血清中葡萄糖与试剂Ⅰ反应生成醌亚胺，加入试剂Ⅱ后于37℃温浴4～7分钟，蔗糖在蔗糖酶的作用下水解生成α-D-葡萄糖和β-D-果糖，水解生成的α-D-葡萄糖与试剂Ⅰ反应产生醌亚胺，仪器在540nm波长处检测，以试剂Ⅰ反应产生的醌亚胺为空白，由试剂Ⅱ反应产生的醌亚胺计算出蔗糖的含量。计算公式为：

反应OD_蔗糖＝OD₂—OD₁×[(SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]

蔗糖浓度＝F×OD_蔗糖

其中OD_蔗糖是蔗糖产生的吸光度。OD₁是样品加入试剂Ⅰ反应后测得的吸光度，OD₂蔗糖是加入试剂Ⅱ反应后测得的吸光度，SV是样品的体积，R₁V₁是试剂Ⅰ的体积，R₂V₂是试剂Ⅱ的体积。F是校正因数。

加入试剂II后OD₁的稀释倍数为[(SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]，加入试剂II后的吸光度即为OD₁×[(SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]。所以，由蔗糖产生的醌亚胺的吸光度为：OD_蔗糖＝OD₂-OD₁×[(SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]，即OD_蔗糖＝OD₂–(3+225)/(3+225+75)×OD₁。只要测出OD₁和OD₂即可计算出蔗糖的浓度。

2.根据权利要求1所述的血清中蔗糖测定方法，其特征在于:试剂Ⅰ中含有葡萄糖氧化酶，过氧化物酶，2，4-二氯酚，4-氨基安替比林，抗坏血酸氧化酶，变旋酶，Proclin-300等有效成分；试剂Ⅱ中仅含有蔗糖酶有效成分。

3.根据权利要求1所述的血清中蔗糖测定方法，其特征在于试剂Ⅰ0.1mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液中含有葡萄糖氧化酶(GOD)10～20KU/L，过氧化物酶(POD)10～20KU/L，2，4-二氯酚2.0～6.0mmol/L，4-氨基安替比林1.0～2.2mmol/L，抗坏血酸氧化酶20～40KU/L，变旋酶1.0～3.0KU/L，Proclin-300 100～300μL/L。试剂II：0.1mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液中含有蔗糖酶2.0～6.0KU/L、Proclin-300 100～300μL/L。

4.根据权利要求1所述的血清中蔗糖测定方法，其特征在于试剂Ⅰ和试剂Ⅱ中0.1mol/L磷酸盐缓冲液pH值为7.5±0.2。

5.根据权利要求1所述的血清中蔗糖的测定方法，其特征在于测定的体积比为：样品∶试剂I∶试剂II＝1∶60～90∶20～30。