[发明专利]一种抗禽类细菌性疫病的复合卵黄抗体

权利要求书

1.一种抗禽类细菌性疫病的复合卵黄抗体，其特征在于，所述复合卵黄抗体包括源自禽类卵黄的禽李氏杆菌抗体、禽多杀性巴氏杆菌抗体和禽大肠杆菌抗体。

2.根据权利要求1所述的抗禽类细菌性疫病的复合卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、准备包括禽李氏杆菌抗原、禽多杀性巴氏杆菌抗原、禽大肠杆菌抗原在内的复合菌体抗原；

S2、对产卵雌性禽类注射该复合菌体抗原，在诱导其免疫反应后收集其卵；

S3、提取并纯化该卵的卵黄抗体，得到抗禽类细菌性疫病的复合卵黄抗体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，以白油佐剂乳化所述禽李氏杆菌抗原、禽多杀性巴氏杆菌抗原和禽大肠杆菌抗原，得到所述复合菌体抗原；所述白油佐剂与三种抗原的体积比为3:1；所述禽李氏杆菌抗原、禽多杀性巴氏杆菌抗原和禽大肠杆菌抗原的重量比为1:1:1。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，禽李氏杆菌抗原、禽多杀性巴氏杆菌抗原和禽大肠杆菌抗原通过以下方法制备：

(i)培养禽李氏杆菌抗原：以羊血营养琼脂斜面传代，37℃培养24h，得到纯菌种后，在营养肉汤培养基中扩大培养24h，收集菌体，得到禽李氏杆菌抗原；

(ii)培养多杀性巴氏杆菌抗原：以羊血营养琼脂斜面传代，37℃培养24h，得纯菌种后，在营养肉汤培养基中扩大培养24h，收集菌体，得到多杀性巴氏杆菌抗原；

(iii)培养大肠杆菌抗原：将菌种接种于麦康凯琼脂平板，置37℃培养24h。得纯菌种后，在营养肉汤培养基中扩大培养24h，收集菌体，得到大肠杆菌抗原。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2具体为：

S201、基础免疫：选用产卵雌性禽类隔离饲养，进行皮下多点注射前述复合菌体抗原，注射量0.5-1ml/只；

S202、强化免疫：基础免疫10-15天后，进行强化免疫，注射前述复合菌体抗原，注射量0.5-1.0ml/只；

S203、超强化免疫：强化免疫10-21天后，超强化免疫1-3次，每次注射前述复合菌体抗原，注射量1.0-2.0ml/只，以保持抗体滴度；

S204、在超强化免疫15-30天之后，收集含有复合抗体的禽卵。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3具体为：

S301、用去离子水稀释卵黄并混匀，调节pH值至5-5.5，并在4℃下静置6-12h，取上清液；

S302、向S301的上清液中加入非离子表面活性剂，至非离子表面活性剂的终浓度为1.2wt.％，并在4℃静置6-12h，过滤后取上清液；

S303、向S302的上清液中加入有机酸并缓慢搅拌，并在4℃下静置6-12h，离心分离后弃去沉淀，得到复合卵黄抗体。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S3具体为：

S311、用4倍体积的去离子水稀释卵黄并混匀，再用醋酸调节pH至5-5.5，并在4℃静置6-12h，取上清液；

S312、向S311的上清液加入泊洛沙姆，至泊洛沙姆的终浓度为1.2％，并在4℃静置6-12h，经微孔滤器过滤后取上清液；

S313、向S313的上清液中加入0.2wt.％的辛酸，并缓慢搅拌，4℃静置6-12h，然后以10000r/min的转速离心30min后弃去沉淀，得到复合卵黄抗体。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤S3还包括：

S300、将含有复合抗体的禽卵在1wt.％的新洁尔灭溶液中浸泡30min后，洗净捞出、自然晾干，将鸡蛋打壳后弃掉蛋清，将蛋黄在无菌纱布上滚动吸干水分后收集备用。

9.根据权利要求2-8任一项所述的制备方法制备得到的复合卵黄抗体。