[发明专利]一种血浆样品前处理技术结合UPLC-MS/MS测定健康人血浆中头孢地尼含量的方法

权利要求书

1.一种血浆样品前处理技术结合UPLC-MS/MS测定健康人血浆中头孢地尼的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）血浆样品的前处理

于96孔板中先加入血浆样品，再依次加入内标溶液和三氯醋酸溶液，涡旋，离心，移液工作站取上清液，再次离心，直接于UPLC-MS/MS分析；

（2）UPLC-MS/MS测定人血浆样品中头孢地尼的含量

超高效液相色谱分离：

有机相为甲醇（B），水相为含0.05%甲酸的2 mM乙酸铵溶液（A）；

采用B相：A相=17:83（V/V）的等度比例洗脱，流速为0.3 mL/min，柱温为40 ℃；

质谱检测：

离子源为安捷伦特有的电喷雾离子源（AJSESI源），离子极性为正离子（Positive），干燥气温度为325℃，干燥气流速为7 L/min，喷雾压为45 psi，鞘气温度为380 ℃，鞘气流速为12 L/min，毛细管电压为4000 V，喷嘴电压为0 V，扫描时间为100 ms，离子检测方式为多反应选择监测（MRM）；

取步骤（1）再次离心后的上清液进行UPLC-MS/MS分析；

血浆样品中头孢地尼含量测定结果的计算。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤（1）中血浆样品来源于健康受试者给药之后收集的血浆，抗凝剂为肝素钠，用量为100μL。

3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，

步骤（1）中内标溶液为头孢克洛溶液，浓度为1 μg/ml，溶剂为10mM乙酸铵溶液，用量为20μL。

4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于，

步骤（1）中三氯醋酸溶液的浓度为10%，用量为180μL。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于，

步骤（1）中涡旋转速为1500 rpm，涡旋时间为5 min，离心转速为4000 rpm，离心温度为4℃，离心时间为10 min。

6.根据权利要求1-5所述的方法，其特征在于，

步骤（1）中96孔板的高度为41 mm，移液工作站整体移液150μL。

7.根据权利要求1-6所述的方法，其特征在于，

步骤（2）中流动相比例为B相：A相=17:83（V/V），固定相为ZORBAX RRHD 50×3.0 mm，1.8 μm，采集时间为5 min。

8.根据权利要求1-7所述的方法，其特征在于，

步骤（2）中自动进样器温度为4℃，离子源为AJSESI源。

9.根据权利要求1-8所述的方法，其特征在于，

步骤（2）中分析质谱仪器为安捷伦G6470A，进样量为10μL。

10.根据权利要求1-9所述的方法，其特征在于，

（1）血浆样品的预处理

采血后，立即移入经肝素钠抗凝处理的采血负压管中，冰浴条件下转移，4℃离心（3500 rpm）10min，分离血浆，24 h内放置于-70℃冰箱中保存待测；

临用前解冻至室温，混匀；

（2）前处理

依次加入1-3倍体积的10-30%的三氯醋酸溶液和适当体积和浓度的内标溶液，充分混匀，涡旋转速为1000-2000 rpm，时间为3-10 min；离心转速为2000-4000 rpm，离心时间为10-30 min，温度0-10 ℃，移液工作站移取适当体积沉淀上清液，再次离心；

（3）UPLC-MS/MS测定人血浆中头孢地尼的含量

有机相为甲醇或乙腈等（B），水相为水缓冲溶液（A），采用B相：A相大约在30:70-10:90的范围内（V/V）的等度比例洗脱，流速为0.3 mL/min，柱温为40℃；

质谱检测：

离子源为安捷伦特有的电喷雾离子源（AJSESI源），离子极性为正离子（Positive），干燥气温度为325℃，干燥气流速为7 L/min，喷雾压为45 psi，鞘气温度为380 ℃，鞘气流速为12 L/min，毛细管电压为4000 V，喷嘴电压为0 V，扫描时间为100 ms，离子检测方式为多反应选择监测（MRM）；

取步骤（1）再次离心后的上清液进行UPLC-MS/MS分析，进样量为5-20μL；

（4）健康人血浆中头孢地尼含量测定结果的计算。