[发明专利]基于CRISPR/Cas技术敲除CAPNS1基因的人神经母细胞瘤细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201810298998.6 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108753772B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 龙鼎新;朱家佳;李小玲;杨越;唐乖 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 温可睿;赵青朵 |
| 地址： | 421001 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas 技术 capns1 基因 神经 细胞 细胞系 构建 方法 | ||
1.靶向人CAPNS1基因CDS区第4外显子和/或第5外显子的sgRNA在构建CAPNS1基因敲除的人神经母细胞瘤细胞系的应用，
所述应用为非疾病治疗的应用，其中：
靶向CAPNS1基因第4外显子的sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；
靶向CAPNS1基因第5外显子的sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.扩增SEQ ID NO.1~3所示的sgRNA的引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4~9所示。
3.敲除CAPNS1基因的载体，其特征在于，包括骨架载体和dsDNA片段；所述dsDNA片段由SEQ ID NO.4~5退火形成；或由SEQ ID NO.6~7退火形成；或由SEQ ID NO.8~9退火形成。
4.敲除CAPNS1基因的试剂，其特征在于，包括权利要求2所述的引物或权利要求3所述的载体。
5.一种敲除人神经母细胞瘤细胞CAPNS1基因的非疾病治疗的方法，其特征在于，将权利要求3所述的载体转染入人神经母细胞瘤细胞中，获得敲除CAPNS1基因的人神经母细胞瘤细胞系。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述人神经母细胞瘤细胞为SK-N-SH细胞。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转染采用电转染，转染的电压为1400V。
8.权利要求5~7任一项所述方法构建的敲除CAPNS1基因的人神经母细胞瘤细胞。
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