[发明专利]一种牛奶中卡那霉素残留的比色检测方法

说明书

一种牛奶中卡那霉素残留的比色检测方法，属于分析化学技术领域。本发明首先将卡那霉素适体(APT_KNA)与生物素标记的探针CP_KNA退火杂交形成双链DNA修饰在链霉亲和素偶联磁珠(SDB)表面，探针SP_KNA和HP_KNA修饰在金纳米颗粒(AuNPs)表面；当体系中存在卡那霉素(KNA)时，KNA与APT_KNA的特异性结合并使APT_KNA脱离SDB，紧接着CP_KNA则与AuNPs修饰的HP_KNA杂交形成SDB‑AuNPs体系；AuNPs表面修饰的SP_KNA结合SAv‑HRP后可催化OPD‑H₂O₂溶液变色，利用450nm处紫外吸光度的变化与卡那霉素浓度的关系，绘制标准曲线，通过测量待测样品的紫外吸光度，即可实现卡那霉素浓度的检测。该方法具有高灵敏度，低成本，易操作等特点，可实现样品中卡那霉素的灵敏测定。

技术领域

本发明是一种牛奶中卡那霉素残留的比色检测方法，特别是牛奶中卡那霉素残留的检测方法，属于分析化学领域。

背景技术

卡那霉素是一种有效的用于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌感染治疗的氨基糖苷类广谱抗生素，是临床上最为常用的抗感染药物之一，由于它作用力较强并且持久，被广泛用于人类以及动物注射、口服等形式的治疗。然而过量使用卡那霉素或者长期食用含有卡那霉素残留的动物源性食品，则会导致一系列不良反应，包括耳、肾脏毒性以及过敏性休克等。因此，建立食品源抗生素残留的检测方法，对实际生产生活具有重大意义。

金纳米颗粒因其独特的物理和化学性质，被广泛用于信号放大的纳米材料之一。可在其表面偶联其他许多功能分子，成功保持其原有生物特性的同时，拥有更好的稳定性。磁珠分离技术与其他分离技术(如色谱分离，离心分离和膜分离)相比具有高通量，低成本，快速和简化操作的显着优点。

目前检测卡那霉素常见技术主要包括有几种方法，如酶联免疫吸附测定法，毛细管电泳，高效液相色谱法，表面等离子体共振，电化学方法与比色法。这些方法中的大多数都有一定的缺陷，繁琐的样本预处理程序、免疫化学方法的试剂昂贵、检测时间长、复杂的仪器。因此，通过磁珠分离和金纳米颗粒信号放大可建立一种灵敏高效，价格低廉、简便快捷的卡那霉素的检测方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是将磁珠分离与金纳米颗粒的信号放大的优势结合起来，建立一种灵敏高效，价格低廉、简便快捷的卡那霉素的检测方法。

本发明的技术方案：本发明是一种牛奶中卡那霉素残留的比色检测方法，首先将卡那霉素适体(APT_KNA)与生物素标记的探针CP_KNA退火杂交形成双链DNA修饰在链霉亲和素偶联磁珠(SDB)表面；探针SP_KNA和HP_KNA修饰在金纳米颗粒(AuNPs)表面。当体系中存在卡那霉素(KNA)时，KNA与APT_KNA的特异性结合并使APT_KNA脱离SDB，紧接着CP_KNA则与AuNPs修饰的HP_KNA杂交形成SDB-AuNPs体系；AuNPs表面修饰的SP_KNA结合SAv-HRP后可催化OPD-H₂O₂溶液变色，利用450nm处紫外吸光度的变化与卡那霉素浓度的关系，绘制标准曲线，通过测量待测样品的紫外吸光度，即可实现卡那霉素浓度的检测。

方法包括以下步骤：磁珠的预处理、探针修饰SDB的制备、金纳米颗粒的制备、探针修饰AuNPs的制备、样品孵育，紫外分光光度计检测。

(1)磁珠的预处理