[发明专利]丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201710057106.9 | 申请日： | 2017-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN106872681B | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 杨绍元;杨少琼 | 申请（专利权）人： | 四川精卫食品检测科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N33/531;G01N33/543 |
| 代理公司： | 51217 成都睿道专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘沁<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 620036 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒，包括酶标板、酶标记抗抗体、丁胺卡那霉素标准品、底物显色液、终止液、洗涤液、丁胺卡那霉素抗体，所述酶标板上包被有丁胺卡那霉素半抗原‑蛋白偶联物。本发明公开的试剂盒可定性、定量检测鸡蛋和鸡肉样本中丁胺卡那霉素、卡那霉素的残留。鸡蛋和鸡肉样本中丁胺卡那霉素和卡那霉素的检测方法，首先处理待测鸡蛋和鸡肉样本，然后用酶联免疫试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、携带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品定性、定量的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 卡那霉素 二合一 快速 检测 免疫 试剂盒 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒，其由酶标板、酶标记抗抗体、丁胺卡那霉素标准品、底物显色液、终止液、洗涤液、丁胺卡那霉素抗体组成，所述酶标板上包被有丁胺卡那霉素-蛋白偶联物，所述丁胺卡那霉素抗体由丁胺卡那霉素-牛血清白蛋白作为免疫原制备得到，所述免疫原通过以下步骤得到：/n称取BSA 20mg使之充分溶解于3mL，pH6.0，0.05mol/LMES缓冲液中，然后迅速加入EDC50mg和NHS50mg，4℃避光，在振荡器中反应12h，得到溶液Ⅰ；称取丁胺卡那霉素标准品50mg，加入1.5mL，pH6.0，0.05mol/LMES缓冲液中，充分溶解，制成丁胺卡那霉素溶液；向溶液Ⅰ中溶液逐滴加入丁胺卡那霉素溶液，边加边搅拌，避光，在4℃下搅拌过夜；过G-25脱盐柱子1次，将脱盐产物装入到处理好的透析袋中，置于0.1mol/L的PBS透析液中，每4h换用一次透析液，透析2天，透析产物分装于1.5mL的离心管中，/n所述酶标板上包被的丁胺卡那霉素-蛋白偶联物由丁胺卡那霉素与卵清蛋白偶联得到，所述丁胺卡那霉素-卵清蛋白偶联物由以下步骤制备得到：/n称取丁胺卡那霉素标准品40mg，溶于2mL的pH8.0，0.05mol/LPB缓冲液中，然后加入0.5%戊二醛溶液 1mL，4℃避光搅拌反应2h，得到溶液Ⅰ，备用；然后，配制0.5% OVA溶液5mL，逐滴滴加溶液Ⅰ，边加边搅拌，再向反应溶液中加入约5.0mg硼氢化钠，于4℃避光搅拌反应2h；过G-25脱盐柱子1次，将脱盐产物装入到处理好的透析袋中，置于0.1mol/L的PBS透析液中，每4h换一次透析液，透析2天，透析产物分装于1.5mL的离心管，/n所述丁胺卡那霉素抗体为丁胺卡那霉素单克隆抗体，由以下步骤制备得到：/n1）动物免疫/n挑选8周龄的Balb/c小鼠，用含有佛氏完全佐剂的丁胺卡那霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物进行皮下注射，免疫剂量为200mg/只，第2，4和8周加强免疫，最后一次免疫在第12周，使其产生多克隆抗体血清，/n2）骨髓瘤细胞和脾细胞的制备/nSP2/0骨髓瘤细胞采用常规的RPMI-1640培养液培养，使细胞处于对数生长期，制成SP2/0骨髓瘤细胞细胞悬液；取经免疫的小鼠脾脏，破碎，过400目的不锈钢纱布过滤制成脾细胞悬液，计数后备用，/n3）细胞融合和单克隆化/n将1×108-3×108 SP2/0骨髓瘤细胞和4×108脾细胞在PEG6000作用下进行融合，对于分泌抗体培养孔，采用间接竞争ELISA测定以筛选阳性孔，采用有限稀释法对阳性孔进行单克隆化，直到得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，/n4）细胞冻存和复苏/n将丁胺卡那霉素的单克隆杂交瘤细胞株成1×106-3×106个/mL的细胞悬液，每个冻存管500mL，先在-4℃放置2h，-20℃放置2h，-50℃放置2h，再保存在液氮中，复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，转入锥形瓶中，加入10-15mL完全培养液中，使用CO2培养箱进行培养，/n5）单克隆抗体的大量生产与纯化/n取健康的Balb/c雌鼠，腹腔注入降植烷0.5mL/只，7天后腹腔注射丁胺卡那霉素的单克隆杂交瘤细胞株2×105-5×105个/只，隔天观察，15天后采集腹水，先用辛酸-饱和硫酸铵法进行腹水初步纯化，后采用DEAE-纤维柱子进行离子交换层析，纯化后抗体-20℃保存，/n所述酶标记抗抗体由羊抗鼠抗抗体与辣根过氧化物酶采用马来酰亚胺基类活泼酯法偶联得到，/n所述丁胺卡那霉素标准品溶液的浓度分别为0mg/L，0.5mg/L，1.5mg/L，4.5mg/L，13.5mg/L，40.5mg/L，/n所述洗涤液为含有0.5-1.5‰ Triton X-100和0.5‰ Proclin300防腐剂的Tris缓冲液，其中，Tris缓冲液浓度为0.05mol/L, pH为8.0，所述千分比均为体积比，/n所述酶标板制备用0.05mol/L，pH8.0磷酸盐包被液或0.05mol/L pH8.0 磷酸盐包被液将丁胺卡那霉素-卵清蛋白稀释成0.05-0.15mg/ml，每孔加入100ml，37℃温育2h或4℃过夜，用洗涤液洗涤2次，拍干，然后再每孔中加入含有0.5%卵清蛋白、3%小牛血清的0.05mol/L，pH7.0的硼酸缓冲液300mL进行封闭，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存，百分比为重量百分比。/n
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- 本实用新型公开了一种梳式Western blot检测试剂盒，第二方形槽内活动安装有齿轮，齿轮表面固定有第一螺纹轴；转动轴滑动安装于圆形通孔内，转动轴端面开有内螺纹通孔；第一方形槽侧壁活动安装有第一锥齿轮，底面活动安装有第二锥齿轮；第一锥齿轮表面开有转动通孔，第二锥齿轮表面固定有内螺纹管；盒体端面固定有支撑板，支撑板内镶嵌安装有梳齿板；梳齿板底面固定有第二螺纹轴；顶盖滑动安装于盒体端面。Western blot抗原膜事先切割为试剂条粘贴于梳齿板表面，节省实验人员的时间，同时也防止试剂条撕裂或者折断，将试剂条排列整齐，进一步节省时间，同时通过滑动顶盖的方式顶出梳齿板，省去了使用者从试剂盒中嵌入或扣出梳齿板的时间，有效提高实验效率。
- 一种毛发毒品痕量快速检测用恒温孵化装置-201920795314.3
- 闫勇 - 山东海旭物联网有限公司
- 2019-05-29 - 2020-01-14 - G01N33/53
- 本实用新型涉及一种毛发毒品痕量快速检测用恒温孵化装置，包括恒温箱、试剂板，恒温箱的内部设置有多根电加热管，还包括与试剂板一一对应的定时提醒装置，恒温箱的内部固设有用来支撑试剂板的支撑板，定时提醒装置包括触头朝下的行程开关、压紧触动装置、安装在前面板处的时间继电器、电铃，压紧触动装置包括竖筒、与竖筒相匹配的圆柱螺旋弹簧、与竖筒相匹配的竖杆，时间继电器包括继电器本体和通电延时触头，所述行程开关与继电器本体串联，所述电铃与通电延时触头串联。所述毛发毒品痕量快速检测用恒温孵化装置使用方便，在将试剂板通过第一通孔插入到恒温箱的内部后，自动进行计时，计时完成后会进行提醒，保证了测试结果的准确性。
- 一种新型的八通道酶标读数仪-201921904709.9
- 栾培松;张立海;张猛;常勇;董飒英 - 烟台艾德康生物科技有限公司
- 2019-11-07 - 2020-01-14 - G01N33/53
- 本实用新型涉及一种新型的八通道酶标读数仪，包括外罩，所述外罩内部设有光源组件、读数组件和主控板组件，所述光源组件与所述读数组件之间通过光纤连接，所述读数组件与所述主控板组件通过电路连接；所述的光源组件包括卤素灯、灯泡支架、遮光盖、第一遮光架、第二遮光架和滤光轮，旋转电机的轴杆穿过所述第二遮光架，所述轴杆的另一端固定连接有带动齿轮，所述滤光轮中间设有连接轴，所述滤光轮上设有圆周排布的滤光片，所述连接轴插接于所述第二遮光架侧面，所述滤光轮与所述带动齿轮啮合。所述的酶标读数仪在使用过程中滤光片更换简易，可以同时进行八通道的检测读数，检测效率高，检测读数准确性高。
- 用于定量间α抑制剂蛋白的方法-201880027257.2
- 林佑彬;D.斯佩罗 - 普罗瑟拉生物公司
- 2018-04-25 - 2020-01-14 - G01N33/53
- 本文描述用于使用基于IAIP配体的测定定量样品(例如，来自受试者)中的IAIP水平的方法。还公开了用于测量IAIP‑IAIP配体复合物的方法，以及使用前述的IAIP定量方法评估、监测和治疗受试者的方法。
- 用于测量分析物的浓度的系统和方法-201880035959.5
- L.陈;J.刘 - 沃特世科技公司
- 2018-05-30 - 2020-01-14 - G01N33/53
- 本公开涉及用于使用在结合垫或其他固体基底上预分配并干燥的材料来确定溶液中分析物浓度的系统和方法。包括分析物的溶液可以重构小瓶内的干燥材料，以在小瓶中产生材料的指定浓度。所得溶液可以用于侧向流动测试。
- 一种化学发光免疫分析仪-201911110673.1
- 余正洋;黄先桃;黄跃东 - 重庆中元汇吉生物技术有限公司
- 2019-11-14 - 2020-01-10 - G01N33/53
- 本发明涉及医疗器械，具体涉及一种化学发光免疫分析仪，包括：反应杯加载装置，包括容纳腔、与容纳腔连接的输送通道、与输送通道下端配合连接的进杯部；样本试剂装置；孵育清洗装置，包括用于放置反应杯并对反应杯中的样本进行孵育的孵育盘、用于对反应杯中的磁微粒进行清洗的清洗盘、用于带动孵育盘和清洗盘转动的第二驱动组件；孵育盘和清洗盘上均设有用于放置反应杯的放置位，孵育盘和清洗盘同心设置，孵育盘位于进杯部的下方；采样装置；反应杯抓取装置；检测装置；控制系统；机架。本发明能够简化现有结构，缩小仪器体积。
- 匀相时间分辨免疫荧光床旁诊断微流控芯片-201920321661.2
- 顾悦;蒋理国 - 迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司
- 2019-03-14 - 2020-01-10 - G01N33/53
- 本实用新型公开了一种匀相时间分辨免疫荧光床旁诊断微流控芯片，包括芯片底板和芯片盖板，所述芯片盖板上开设有用于添加检测样本的加样口，微流控芯片对应所述加样口具有滤血垫片，所述芯片底板上依次开设有用于容纳所述滤血垫片的滤血垫腔、与所述滤血垫腔相连通的反应腔以及超疏水阀道，所述芯片盖板对应所述超疏水阀道开设有排气孔，所述滤血垫片上封闭有抗人红细胞抗体，所述反应腔中包被有Eu标记单克隆抗体和XL665标记单克隆抗体。本实用新型的微流控芯片采用HTRF检测技术，适合快速床旁检测，且微流控芯片实现全血一步加样检测功能，大大缩短检测时间，操作简便，检测时间短，成本低，灵敏度高，线性范围宽，体积小，便于携带，可批量生产。
- 一种化学发光免疫分析仪-201920366400.2
- 张丽;邹文兵;宋知扬 - 张丽
- 2019-03-22 - 2020-01-10 - G01N33/53
- 本实用新型公开了一种化学发光免疫分析仪，包括壳体，所述壳体内部为空腔结构，所述壳体内部两侧均焊接有第一固定板，所述第一固定板底板焊接有导杆，所述导杆与所述壳体相焊接，所述壳体内部底部焊接有第一弹簧，所述第一弹簧的一端焊接有第二固定板，所述第二固定板套设在所述导杆外耳；本实用新型通过导杆、第一弹簧、第二弹簧、滑动块、连杆、套管、活动杆等零部件组成结构，此结构保证分析仪本体在工作时，检测结果的正确性，且本实用新型通过第四固定板、弧形导板、滑动弧形板、风扇、电机、不完全齿轮等零部件组成结构，此结构可以使风扇规律性移动，降低壳体内部温度，提高检测结果的正确性。
- 一种可连续检测的金标仪-201920821381.8
- 邵伟;刘新星;肖锦涛;项帅 - 烟台百博自动化科技有限公司
- 2019-06-03 - 2020-01-10 - G01N33/53
- 本实用新型公开了一种可连续检测的金标仪，具体涉及一种可对多个试剂卡进行检测并将检测完成后的试剂卡与未检测的试剂卡自动分离收集，解决了现有技术中每次只能分析一张试剂卡，无序样品和试剂卡很可能被人为弄混，导致样品无效或误诊的问题。罩壳上部固定有定位盘，转盘周向开设有多个用于将试剂卡固定的卡位，定位盘上部设置有转盘，转盘中央固定中轴，定位盘中部安装有轴套，轴套与中轴之间通过复合轴承转动连接；所述中轴下部固定有从动轮，从动轮一侧设置有主动轮，主动轮连接步进电机输出端，主动轮与从动轮之间通过传动件连接；所述转盘上部设置有罩盖，罩盖边缘与罩壳上缘嵌合固定。
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