[发明专利]一种用于前列腺癌治疗评估的联合基因标志物及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了可以用于对前列腺癌化疗过程中耐药性进行预评估的分子标记物组合，该分子标记物是由2个前列腺癌敏感基因(P53基因、GSTP1基因)和1个miRNA(miRNA‑155)所组成，可以应用于对化疗耐药性的评估；同时，本发明还提供了应用于评估的引物组和试剂盒；本发明还提供了上述引物组和试剂盒在分子标记表达量的联合判别方程中的应用。通过评估上述基因的相对表达量，可以较好地对多西他赛和泼尼松联合治疗前列腺癌中存在的耐药性进行评估。

技术领域

本发明属于前列腺癌治疗与诊断技术领域，特别涉及一种用于对前列腺癌化疗效果和耐药性评估的基因联合标志物，以及由该联合标志物制备得到的检测试剂盒。

背景技术

近年来，我国前列腺癌发病率显著升高。与西方国家前列腺癌患者分期构成不同，我国近70%的前列腺癌患者初诊时就已是晚期转移患者。虽然绝大多数患者对内分泌治疗敏感，但几乎所有患者在治疗18个月后会进展至激素抵抗性前列腺癌(HRPC)，患者生存期一般不超过2年。2004年TAX327和SWOC-9916两项研究结果表明，多西他赛为基础的化疗较米托蒽醌能显著延长HRPC患者的总体生存期，一举奠定了其作为HRPC一线治疗药物的地位。但是，在临床上仍然有患者出现多西他塞治疗效果不佳的问题，因此，预先对与多西他塞治疗耐药相关情况进行评估具有重要意义。

miRNA是新近证明的一类高度保守的、内源性非编码的小分子RNA，在转录后水平调节基因的表达。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节通路，包括生长发育、细胞增殖和凋亡、信号传导等一系列重要的生命调节过程。已发现miRNA的表达异常可能导致人类多种疾病，如癌症、自身免疫性疾病及肾脏疾病等。研究显示miRNA参与调控人体细胞中细胞代谢、增值、分化、凋亡、免疫等过程；它的异常表达在疾病的发生发展中起了关键性作用。研究显示miRNA在病理发展中会快速从组织中释放入血，在血清、血浆、唾液和尿液中，这些胞外miRNA与肿瘤的不同病理状态有关。Weber等钉检测了12种来自于不同阶段怀孕妇女和不同泌尿道上皮细胞肿瘤患者的体液和尿液标本中的miRNA，应用定量PCR对这些体液中的miRNA做广谱分析。结果显示miRNA在所有体液中均存在，在不同体液中

构成比明显不同，一些高水平的miRNA在多种体液中表达相同，而一些miRNA在特定体液中富集，还观察到不同生理状态的尿液标本具有独特的miRNA模式。提示使用特定miR-NA水平可用作检测和监测不同病理生理学状态。

尿液中蕴藏着大量生物学信息且具有无创收集、标本处理相对简便的优势，检测尿液中RNA类的肿瘤标志物还可以用于诊断其他泌尿系统的实体肿瘤，而且这类循环miRNA的独特表达模式与特定的疾病相关，特别是早期阶段，其高特异性和敏感性的潜能可用于肿瘤分期和早期预测引。Bryant等使用含有742个miRNA的qRT-PCR芯片分析了78例前列腺癌患者和28例健康对照血清标本，确定了12个表达量差异的miRNA。进而检测135份健康人与前列癌患者尿液标本中5个选定的miRNA，发现肿瘤患者尿液中miR-107和miR-574-3p水平显著高于健康对照，均可诊断出前列腺癌患者，并且准确性高于检测尿液前列腺特异性抗原(PSA)。

利用miRNA对多西他赛治疗HRPC耐药性能进行判断目前尚无研究。

发明内容

本发明的目的是提供了可以用于对前列腺癌化疗过程中耐药性进行预评估的分子标记物组合，该分子标记物是由2个前列腺癌敏感基因(P53基因、GSTP1基因)和1个miRNA(miRNA-155)所组成，可以应用于对化疗耐药性的评估；同时，本发明还提供了应用于评估的引物组和试剂盒；本发明还提供了上述引物组和试剂盒在分子标记表达量的联合判别方程（联合标志物）中的应用。

本发明的第一个方面：