[发明专利]一种高产香叶醇葡萄糖苷的大肠杆菌表达菌株及其应用

权利要求书

1.一种高产香叶醇葡萄糖苷的大肠杆菌表达菌株，其特征在于，所述大肠杆菌表达菌株共表达乙酰乙酰辅酶A硫解酶基因atoB、羟甲基戊二酰辅酶A合成酶基因HMGS、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因tHMGR、甲羟戊酸激酶基因ERG12、磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因MVD1、异戊烯基焦磷酸异构酶基因idi、香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*、香叶醇合成酶基因GES、香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基转移酶基因AdGT4；

所述香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述香叶醇合成酶基因GES的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述糖基转移酶基因AdGT4的核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示；所述大肠杆菌为BL21(DE3)或MG1655；

所述HMGS基因的GenBank登录号GeneID为854913；所述tHMGR基因的GenBank登录号GeneID为854900；所述ERG12基因的GenBank登录号GeneID为855248；所述ERG8基因的GenBank登录号GeneID为855260；所述MVD1基因的GenBank登录号GeneID为855779；所述atoB基因的GenBank登录号GeneID为946727；所述idi基因的GenBank登录号GeneID为949020。

2.权利要求1所述高产香叶醇葡萄糖苷的大肠杆菌表达菌株的制备方法，包括以下步骤：

构建共表达乙酰乙酰辅酶A硫解酶基因atoB、羟甲基戊二酰辅酶A合成酶基因HMGS、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因tHMGR、甲羟戊酸激酶基因ERG12、磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因MVD1、异戊烯基焦磷酸异构酶基因idi和香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*的第一表达载体；

构建共表达香叶醇合成酶基因GES、香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基转移酶基因AdGT4的第二表达载体；

将所述第一表达载体和第二表达载体共同转化大肠杆菌，获得高产香叶醇葡萄糖苷的大肠杆菌表达菌株。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*是通过定点突变法尼基焦磷酸FPP合成酶基因ispA的核酸序列获得；所述定点突变的引物为ispA*-P1，ispA*-P2；所述ispA*-P1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述ispA*-P2的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*是通过定点突变法尼基焦磷酸FPP合成酶基因ERG20的核酸序列获得；所述定点突变的引物为ERG20*-P1，ERG20*-P2；所述ERG20*-P1的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述ERG20*-P2的核苷酸序列如SEQ IDNo.8所示。

5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述第一表达载体通过将大肠杆菌表达载体pBbA5c-MevT(CO)-MBIS中的ispA基因替换为香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*制备获得。

6.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于，所述第二表达载体通过在大肠杆菌表达载体pET-duet1上连接香叶醇合成酶基因GES、香叶基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基转移酶基因AdGT4制备获得。

7.权利要求1所述的大肠杆菌表达菌株以及权利要求2~6任意一项所述制备方法制备获得的大肠杆菌表达菌株在生产香叶醇葡萄糖苷中的应用。