[发明专利]疏水层析动态清除重组人神经生长因子前体的方法

权利要求书

1.一种使用疏水作用层析清除重组人神经生长因子中前体的方法，其特征见如下步骤：

1)原料预处理：将CHO细胞培养物先经过一次或多次柱层析，初步纯化，得到待层析的原料；

2)原料清洗：将步骤1)所得物质加载于疏水层析柱中，用清洗缓冲液清洗，弃去含有前体的流出液；

3)用洗脱缓冲液对进行了步骤2)的层析柱进行洗脱，得到重组人神经生长因子纯品。

2.权利要求1所述的方法，步骤2)中，所述清洗用含醇和NaCl的缓冲液作为清洗缓冲液。

3.权利要求2所述的方法，所述清洗缓冲液同时满足以下条件，以清除前体：

A电导率比步骤3)的层析洗脱缓冲液高；

B醇的含量低于步骤3)所用的层析洗脱缓冲液中醇的含量；

C pH与步骤1)所得产物范围相同。

4.权利要求2所述的方法，所述醇是乙醇。

5.权利要求2所述的方法，所述清洗缓冲液中乙醇含量的体积比是4％-6％。

6.权利要求2所述的方法，所述清洗缓冲液中NaCl的含量是200～400mM。

7.权利要求1所述的方法，步骤2)中，所述清洗采用“动态清洗”方式，即根据步骤1)柱层析洗脱产物峰面积线性关系式得出清洗体积，按下式计算：

清洗体积(CV)＝8.5-峰面积/ml树脂/1000。

8.权利要求1所述的方法，步骤3)中，所述洗脱缓冲液含醇的缓冲液，或含醇和NaCl的水溶液。

9.权利要求8所述的方法，所述洗脱缓冲液中乙醇含量的体积比是7％-20％。

10.权利要求8所述的方法，所述洗脱缓冲液中NaCl的含量是0-100mM。