[发明专利]用于快速进行核酸检测的痰液前处理方法

说明书

本发明公开了一种用于快速进行核酸检测的痰液前处理方法包括下述步骤：第一步，在收集的痰液标本中加入4倍量浓度4%~30% 的NaOH溶液，涡旋震荡使之液化，并室温放置5‑10min；第二步，在第一步处理后的样本液中加入浓度20%~80%的柠檬酸溶液震荡混匀；第三步，在第二步处理后的样本液中加入浓度5~14%的硫脲震荡混匀后，室温静置，去除沉淀即可。本发明的优点在于方法简单快捷，由于整个前处理过程不需要离心，操作方便，耗时较短（不足15分钟）；经本发明方法前处理后的样本液灵敏度较高，最低可检测出30个菌/ml，特异性好，根据临床样本验证结果，阴性符合率可达100%。

技术领域

本发明涉及痰液标本的处理，尤其是涉及一种用于快速进行核酸检测的痰液前处理方法。

背景技术

结核分枝杆菌引起的结核病是常见的人类传染病之一，约三分之一的世界人口曾经感染，亚洲地区感染者占全世界的三分之二，所以结核病已成为威胁人类健康的全球性公共卫生问题。临床检测结核分枝杆菌主要有微生物学培养、免疫学检测及近年来发展迅速的分子生物学即核酸检测技术。

目前临床检测结核分枝杆菌的主要样本类型为痰液标本，但是痰液成分较复杂，其中主要包含粘液、异物、病原微生物、各种炎症细胞及坏死脱落的粘膜上皮细胞等成分，由于痰中粘单白、酸性糖蛋白、Ca^2＋含量高，导致痰液粘稠度很高，所以痰液在参与核酸提取前需要进行特殊的前处理，才能够参与后续PCR扩增检测。传统的痰液处理方法为碱裂解法，主要为NaOH液化，高速离心取沉淀，生理盐水或磷酸盐溶液清洗沉淀后，再离心收集菌体，该方法处理步骤复杂，操作不便捷且耗时较长（≥60min），反复离心洗涤过程中菌体损失率高，杂质去除率低，导致后续检测结果容易出现假阴性。目前市面上与其配合的核酸检测试剂盒采用的核酸提取方法为煮沸法，该方法不能与全自动核酸检测技术配套且灵敏度较低，易造成假阴性结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于快速进行核酸检测的痰液前处理方法，该方法具有快速、便捷、检测灵敏度高、特异性好、可与全自动核酸检测技术配套等优点，提高了临床痰液标本处理工作的效率及准确度。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于快速进行核酸检测的痰液前处理方法包括下述步骤：

第一步，在收集的痰液标本中加入4倍量浓度4%~30% 的NaOH溶液，涡旋震荡使之液化，并室温放置5-10min；

第二步，在第一步处理后的样本液中加入浓度20%~80%的柠檬酸溶液震荡混匀；

第三步，在第二步处理后的样本液中加入浓度5~14%的硫脲震荡混匀后，室温静置，去除沉淀即可。

所述第一步中NaOH溶液的最佳浓度为4%。

所述第二步中柠檬酸溶液的最佳浓度为40%。

所述第三步中硫脲的最佳浓度为10%。

本发明的优点在于方法简单快捷，由于整个前处理过程不需要离心，操作方便，耗时较短（不足15分钟）；经本发明方法前处理后的样本液灵敏度较高，最低可检测出30个菌/ml，特异性好，根据临床样本验证结果，阴性符合率可达100%。