[发明专利]一种蛋白质巯基化修饰检测的方法

权利要求书

1.一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：将经过硫氢化钠溶液、MMTS溶液、Biotin-HPDP溶液、HENS缓冲液顺序浸泡的固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜置于BSA封闭液中，按常规Western blot实验操作检测，一抗为Biotin抗体。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜制作过程为，将硝酸纤维素膜于TBST缓冲液中浸泡20min，进行活化，然后将活化的硝酸纤维素膜室温晾干，在晾干的活化的硝酸纤维素膜上滴加蛋白样品。

3.根据权利要求2所述的一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：蛋白样品为经大肠杆菌原核表达的植物蛋白，取0.5~1.5 μg植物蛋白滴5个圆斑。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：硫氢化钠溶液浸泡是指将固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜置于50-100 μmol/L的NaSH水溶液中，避光条件下4℃反应20min。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：MMTS溶液浸泡是指将经过硫氢化钠溶液浸泡的固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜置于10mM的MMTS溶液中，避光条件下50℃反应25min，期间每2min混匀一次，利用MMTS封闭蛋白质Cys残基的自由巯基-SH。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：Biotin-HPDP溶液浸泡是指将经过硫氢化钠溶液、MMTS溶液顺序浸泡的固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜置于2mM 的Biotin-HPDP溶液中，室温反应3h。

7.根据权利要求1所述一种蛋白质巯基化修饰检测的方法，其特征在于：HENS缓冲液浸泡是指将经过硫氢化钠溶液、MMTS溶液、Biotin-HPDP溶液顺序浸泡的固定有蛋白样品的活化的硝酸纤维素膜置于HENS 缓冲液中浸泡2次，每次5min，间隔1分钟。