[发明专利]枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01，其特征在于，其保藏编号为CDMCCNO.60294。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01在制备饲料添加剂中的应用。

3.一种饲料添加剂，其特征在于，该饲料添加剂以权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01或/和其代谢物为活性成分。

4.根据权利要求3所述的饲料添加剂，其特征在于，该饲料添加剂为粉剂、颗粒剂或液体剂。

5.根据权利要求4所述的饲料添加剂，其特征在于，该饲料添加剂由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01的培养物以及饲料中可以接受的载体制备而成。

6.一种饲料，其特征在于，包含有权利要求3至5任一项所述饲料添加剂。

7.一种权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）一级斜面培养：将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01接种于一级斜面培养基上进行活化培养，得到一级枯草芽孢杆菌单菌落；

（2）二级液体培养：将步骤（1）所得一级枯草芽孢杆菌单菌落接种于二级培养液中进行种子培养，得到二级枯草芽孢杆菌种子液；

（3）三级扩大培养：将步骤（2）得到的二级枯草芽孢杆菌种子液体接种于三级液体培养基中进行扩大培养，得到三级枯草芽孢杆菌种子液；

（4）液体发酵：将步骤（3）所得的三级枯草芽孢杆菌种子液接种于液体发酵培养基中，进行发酵培养。

8.根据权利要求7所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01的发酵方法，其特征在于，步骤（1）中：所述活化培养的条件包括：温度为32~38℃，时间为25~35h；所述的一级斜面培养基的配方包括：大豆蛋白胨6.0~12.0 g/L，酵母膏6.0~12.0 g/L，氯化钠1.0~4.0g/L，葡萄糖4.0~10.0 g/L，琼脂20~30 g/L，溶剂为水；

步骤（2）中，所述种子培养的条件包括：装液量为250~300mL/1000mL，温度为33~37℃，转速为150~200rpm，时间为25~30h；所述的二级液体培养的配方包括：大豆蛋白胨6.0~12.0g/L，酵母膏6.0~12.0 g/L，氯化钠1.0~4.0 g/L，葡萄糖4.0~10.0 g/L，溶液为水；

步骤（3）中，所述扩大培养的条件包括：接种量为1.0~4.0%，温度为33~37℃，转速为150~200rpm，时间为25~30h；所述的三级液体培养基的配方包括：大豆蛋白胨6.0~12.0 g/L，酵母膏6.0~12.0 g/L，氯化钠1.0~4.0 g/L，葡萄糖4.0~10.0 g/L，溶剂为水；

步骤（4）中，所述发酵培养的条件为：罐压0.02~0.10MPa，搅拌转速150~200rpm，通风量1.0：（0.2~1.0），发酵时间20~30 h；所述的发酵培养基的配方包括：氮源10~40 g/L，碳源60~120g/L，KH₂PO₄ 1.5~2.5 g/L，CaCO₃ 6.0~12.0 g/L，溶剂为水。

9.根据权利要求8所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01的发酵方法，其特征在于，所述的氮源为鱼粉、豆粕、棉籽粕、菜籽粕、尿素、硫酸铵、磷酸氢二铵、蛋白胨、酵母抽提物中的至少一种；所述的碳源为葡萄糖、淀粉、蔗糖、糖蜜中的至少一种。

10.一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

参照权利要求7至8任一项所述的方法进行发酵，获得权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DFS01的培养物；

所述培养物直接用作饲料添加剂，或者将所述培养物与饲料中可以接受的载体制备成饲料添加剂。