[发明专利]一种水凝胶肿瘤疫苗的制备方法以及由其制备的水凝胶肿瘤疫苗和其用途

说明书

本发明公开一种水凝胶肿瘤疫苗的制备方法以及由其制备的水凝胶肿瘤疫苗和其用途。所述制备方法包括：1)肿瘤细胞预处理：向作为载体的肿瘤细胞中加入疏水性药物，得到预处理的肿瘤细胞；2)水凝胶载体的制备：将多肽和无机碱溶解于缓冲液中，充分溶解后，30‑90℃水浴加热5‑50min，即制备得到水凝胶载体；3)水凝胶肿瘤疫苗的制备：取步骤2)中制得的水凝胶载体，在涡旋的状态下，缓慢加入步骤1)中制备的预处理的肿瘤细胞，混合均匀，静置得到水凝胶肿瘤疫苗。该水凝胶肿瘤疫苗将肿瘤细胞疫苗与疏水性药物联合，可以增强特异性抗原呈递的同时抑制免疫逃避机制，高效抑制肿瘤转移和复发。

技术领域

本发明涉及生物医药及肿瘤治疗领域，具体涉及基于机体肿瘤细胞的个性化肿瘤疫苗的制备方法以及由该制备方法制备的肿瘤疫苗和其用途。

背景技术

肿瘤复发及转移是肿瘤治疗的最大挑战。传统治疗手段如手术、化疗和放疗对复发及转移性肿瘤疗效有限。近年来癌症免疫疗法对复发或转移肿瘤疗效显著，正受到广泛关注。其中，肿瘤疫苗在预防癌症复发和转移的治疗中发挥重要作用，但传统肿瘤疫苗在不同患者体内的疗效差异巨大。主要是目前多数研究的肿瘤疫苗是针对于肿瘤细胞或组织的某种单一抗原分子，而越来越多的研究显示肿瘤的发生发展并不是由于单一基因的突变，而是由多个靶点的基因或蛋白分子的变异所引起的。随着测序技术的发展，肿瘤新抗原为个性化肿瘤疫苗的设计提供了新的思路，然而，肿瘤新抗原的技术周期长、成本高昂，不利于晚期、高恶性程度癌症病人的长期治疗。因此，本领域亟需构建一种工艺简单的个性化肿瘤疫苗用于高效预防癌症复发和转移。

肿瘤细胞包含大量肿瘤抗原，如果将肿瘤患者实体肿瘤手术切除，收集同源肿瘤细胞、改造并高效调控抗原释放行为，有望作为个性化肿瘤疫苗诱导同一病人产生高强度特异免疫应答，抑制其癌症复发和转移。但是由于机体内存在大量的免疫负调节因子如程序性死亡受体1/程序式死亡-配体1(PD1/PD-L1)，白细胞介素10(IL-10)，色氨酸降解酶(IDO-1)等，极大地减弱了肿瘤细胞的免疫原性，避免了免疫系统对肿瘤抗原的识别。因此，将癌细胞疫苗与免疫调节剂合用，增强特异性抗原呈递的同时抑制免疫逃避机制，有望为复发及转移性肿瘤个性化治疗提供新思路。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于机体肿瘤细胞的个性化的水凝胶肿瘤疫苗的制备方法以及由其制备的肿瘤疫苗和其用途。由本发明的方法制备的肿瘤疫苗能够有效抑制肿瘤复发与转移。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种水凝胶肿瘤疫苗的制备方法，步骤如下：

(1)肿瘤细胞预处理：向作为载体的肿瘤细胞中加入疏水性药物，得到预处理的肿瘤细胞；

(2)水凝胶载体的制备：将多肽和无机碱溶解于缓冲液中，充分溶解后，30-90℃水浴加热5-50min，即制备得到水凝胶载体，其中，所述多肽为(FMOC)FMOC-KCRGDK，即N端的赖氨酸的两个氨基都被FMOC保护；和

(3)水凝胶肿瘤疫苗的制备：取步骤(2)中制得的水凝胶载体，在涡旋的状态下，缓慢加入步骤(1)中制备的预处理的肿瘤细胞，直至混合均匀，静置得到水凝胶肿瘤疫苗。

本方法步骤(1)中，优选地，所述肿瘤细胞可以为各种来源的实体肿瘤细胞株，优选为4T1乳腺癌肿瘤细胞、EMT6乳腺癌肿瘤细胞、MCF-7乳腺癌肿瘤细胞、CT26结肠癌肿瘤细胞、B16-F10黑色素瘤肿瘤细胞，或者，也可以是取自肿瘤患者的手术肿瘤切块，从中分离原代肿瘤细胞，在体外进行培养得到扩增肿瘤细胞。