[发明专利]一种水凝胶肿瘤疫苗的制备方法以及由其制备的水凝胶肿瘤疫苗和其用途

权利要求书

1.一种水凝胶肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)肿瘤细胞预处理：将作为载体的肿瘤细胞置于Foxp3固定液中孵育10-60min，即可得到固定、破膜的肿瘤细胞；向肿瘤细胞中加入疏水性药物和有机溶剂，室温搅拌，离心，用PBS洗涤，去除游离的疏水分子，得到预处理的肿瘤细胞；

(2)水凝胶载体的制备：将多肽和无水碳酸钠溶解于pH为7.4的PBS缓冲液中，充分溶解后，70℃水浴加热50min，即制备得到水凝胶载体，其中，所述多肽为(FMOC)FMOC-KCRGDK，所述多肽N端的赖氨酸的两个氨基都被FMOC保护，所述多肽的浓度为1-50mg/mL，所述多肽的质量为5mg，所述无水碳酸钠的质量为0.92mg；和

(3)水凝胶肿瘤疫苗的制备：取步骤(2)中制得的水凝胶载体，在涡旋的状态下，缓慢加入步骤(1)中制备的预处理的肿瘤细胞，直至混合均匀，静置得到水凝胶肿瘤疫苗。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述预处理的肿瘤细胞中的肿瘤细胞数量与疏水性药物的比例为1×10⁷个:(5-200)μg，所述有机溶剂的体积为1-10mL，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、二甲亚枫、乙腈。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞与Foxp3固定液的数量体积比是1×10⁸个细胞/(1～10)mL。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞选自4T1乳腺癌肿瘤细胞、EMT6乳腺癌肿瘤细胞、MCF-7乳腺癌肿瘤细胞、CT26结肠癌肿瘤细胞、B16-F10黑色素瘤肿瘤细胞。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞为取自肿瘤患者的手术肿瘤切块，从中分离原代肿瘤细胞，在体外进行培养得到的扩增肿瘤细胞。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述疏水性药物为荧光分子、光敏分子、化疗药物或小分子免疫调节剂。

7.一种水凝胶肿瘤疫苗，由权利要求1-3中任一项所述制备方法得到。

8.权利要求7所述水凝胶肿瘤疫苗在制备预防肿瘤复发与转移的药物中的用途。