[发明专利]一种偶氮染料降解产物的液相分离方法

说明书

本发明公开了一种偶氮染料降解产物的液相分离方法，首先对酸性红18催化降解液进行冻干除杂，然后进行HPLC分离。本发明利用MnP对AR18脱色降解，通过探索不同类型的液相色谱柱、设置不同流动相及比例、流速、检测波长等因素，得到最佳HPLC分离条件，能够对AR18的六种降解产物达到较好的分离。

技术领域

本发明涉及一种分离方法，具体地说是一种偶氮染料降解产物的液相分离方法。

背景技术

偶氮染料废水具有COD值高、色度高、成分复杂、毒性大等特点，因而进入环境水体中很难降解，直接影响气体的溶解度和水体的透光性，进而进导致水生动物的正常生命活动受限，从而破坏整个水体生态平衡。一些传统的物理化学、生物法已经用于染料废水的降解，但由于降解能力不同，可能产生更多有毒的中间产物。由于偶氮染料是带有羟基、磺酸基等助色基团的共轭发色体系，因而产物含有亲水性较强的磺酸根离子及羟基，不利于降解产物的分离提取。目前，偶氮染料的降解产物的分离方法不尽相同，而有关酸性红18降解的产物的液相分离并没有详细报道。

发明内容

本发明是为了避免上述现有技术所存在的不足之处，旨在提供一种偶氮染料降解产物的液相分离方法，以使偶氮染料降解产物能够获得较好的分离，有利于对染料脱色降解的中间产物及终产物的鉴定分析，为今后研究染料降解途径和降解机理奠定基础。

本发明以酸性红18(AR18)为模式染料，利用锰过氧化物酶(Manganeseperoxidase，MnP，EC1.11.1.13)对其催化降解，反应1h脱色率高达90％以上。

本发明偶氮染料降解产物的液相分离方法，包括如下步骤：

步骤1：冻干除杂

取20mL酸性红18催化降解液，用冷冻干燥剂机-50℃冻干后用1mL的双蒸水溶解，有机相乙腈除去蛋白，离心后过滤，旋蒸，双蒸水再溶解，过0.22μm滤膜待用；

步骤2：HPLC分离

将步骤1所得处理液送样进行HPLC分离，操作参数如下：

色谱柱C8(ZORBAX 300SB-C8150mm×4.6mm)

流动相：乙腈-水溶液

洗脱方式：梯度洗脱

洗脱速度：0.5mL/min

洗脱时间：30min

柱温：25℃

进样体积：20μL

梯度洗脱时，洗脱参数为：0-5min：2-5％乙腈，水(0.1％甲酸)；5-30min：5-40％乙腈，水(0.1％甲酸)。

紫外检测波长280nm。

本发明利用MnP对AR18脱色降解，通过探索不同类型的液相色谱柱、设置不同流动相及比例、流速、检测波长等因素，得到最佳HPLC分离条件，能够对AR18的六种降解产物达到较好的分离。在保留时间4.33min、7.53min、15.81min、16.51min、17.42min、19.92min处有明显的产物生成。

附图说明

图1是MnP催化AR18脱色降解的UV-vis光谱图。

图2是MnP催化AR18降解不同时间所获得降解产物的HPLC图。

图3是MnP催化AR18降解不同时间所获得降解产物冻干浓缩后萃取液相分离谱图。

图4是MnP催化AR18降解不同时间所获得降解产物的HPLC图(a)对照组(b)实验组。