[发明专利]非编码RNA及其在骨肉瘤转移检测中的应用

说明书

本发明涉及非编码RNA及其在骨肉瘤转移检测中的应用，更具体的涉及非编码RNA—ENSG00000233682、miR‑193b‑3p、miR‑1197及其在诊治骨肉瘤转移中的应用。发明人采用高通量测序研究骨肉瘤转移患者、原发患者及正常人群的mRNA、miRNA、lncRNA表达情况，发现ENSG00000233682、miR‑1197、miR‑193b‑3p不仅在骨肉瘤转移中组中高表达，前者和后两者之间还存在靶向关系，显示他们有望成为骨肉瘤转移临床诊断中新的分子标志物。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及非编码RNA—ENSG00000233682、miR-193b-3p、miR-1197及其在诊治骨肉瘤转移中的应用。

背景技术

人类基因绝大部分可发生转录，但产物大多数为非编码RNA(ncRNA)，部分ncRNA可通过影响基因及表观遗传学对生命活动起调节作用，长链非编码RNA(lncRNA)与微小RNA(miRNA)是其中最重要的两类，它们在多种生命活动中扮演重要角色。

lncRNA为一类转录本长度大于200nt，缺少有效开放性阅读框，不编码蛋白质的RNA分子，可在组织器官分化过程中动态的表达与不同的剪接方式，因此lncRNA具有时间及空间特异性。目前lncRNA按转录位置的不同可分为5类:位于基因间区的lncRNA；天然反义链lncRNA；内含子区lncRNA；正义链lncRNA；双向lncRNA。

miRNA是一类不具有开放性阅读框架、长度为18-25nt的非编码短序列RNA，其广泛存在于真核生物中。成熟的miRNA 5'端有一磷酸基团3'端为羟基，这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来。绝大多数miRNA具有高度的保守性、时序性和组织特性。

很多研究表明miRNA是lncRNA发挥作用的一个重要环节，在很多疾病的病变细胞中发现某一lncRNA与某些miRNA存在一定的数量关系，且它们的数量变化与相关疾病的发生发展密切相关(Functional interactions among microRNAs and long noncodingRNAs,Semin Cell Dev Biol，2014，34:9-14)。lncRNA与miRNA都有各自的调控网络，但是两者的调控网络并不是独立存在的，很多时候在一种疾病的发生发展中lncRNA与miRNA的调控是相互依存、相互交织的，共同形成了一个复杂的调控网络。

骨肉瘤是一种起源于间叶组织的骨骼系统恶性肿瘤，发病率和死亡率在原发性骨肿瘤中位居第一。骨肉瘤发生发展进程快，转移率高，以股骨远端和胫骨近端转移最为常见，患者预后水平低。随着肿瘤发生分子机制的不断深入研究，分子靶向治疗逐渐被认为是攻克肿瘤的突破口，尤其是探索在骨肉瘤转移中有效的分子靶点成为现今骨肉瘤研究的热点问题。

申请人之前曾采用高通量测序研究转移性骨肉瘤患者及健康人的miRNA的表达数据，发现miR-4520-3p、miR-1299和骨肉瘤转移相关(ZL2016100688631和ZL2016100686566)，本申请中，发明人进一步对骨肉瘤转移患者、原发患者及正常人群，从mRNA到miRNA到lncRNA进行多维度研究。本发明提供与骨肉瘤转移密切相关的非编码RNA—ENSG00000233682、miR-193b-3p、miR-1197，为骨肉瘤转移机制研究提供很好的思路，为骨肉瘤转移临床诊断提供新的分子标志物。

发明内容

本发明的目的在于提供检测非编码RNA制剂在制备诊断骨肉瘤转移试剂中的应用，所述非编码RNA为lncRNA和/或miRNA。

进一步，lncRNA为ENSG00000233682；miRNA为miR-1197或miR-193b-3p。

ENSG00000233682的序列见序列表SEQ ID NO 1。

miR-1197的序列见序列表SEQ ID NO 2。