[发明专利]一种基因检测探针及基因检测方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其是一种基因检测探针，包括含有检测目标基因的cDNA探针，其具有特定标记。本发明还公开了一种利用基因检测探针的基因检测方法，包括以下步骤：S1、收集目标细胞、组织活体1‑1.5g，用7‑9mL用7‑9mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，提取样本RNA；S2、构建PCR反应体系，包括提取的样本RNA 1ul，上下游引物和探针混合液2‑3.5ul，PCR酶混合液0.3‑0.8ul，MasterMix 3‑6ul，进行PCR扩增；S3、进行琼脂糖凝胶电泳并送交测序。本发明提出了一种基因检测探针，能够有助于基因检测，且提出了相应的标记方法，简单易于实现，适合推广。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种基因检测探针及基因检测方法。

背景技术

基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术，是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞，扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法，从而使人们能了解自己的基因信息，明确病因或预知身体患某种疾病的风险。

疾病诊断是用基因检测技术检测引起遗传性疾病的突变基因。目前应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。基因探针能够用于基因检测，但是现有技术中缺乏对基因探针进行标记的方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种基因检测探针及基因检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种基因检测探针，包括含有检测目标基因的cDNA探针，其具有特定标记。

优选的，其制备方法如下：首先从目标细胞、组织中分离纯化相应的mRNA，之后在逆转录酶的作用下，合成与之互补的DNA即cDNA，之后添加特定标记。

优选的，目标细胞、组织为造血细胞，相应的mRNA为α或β珠蛋白mRNA。

优选的，添加特定标记的方法如下，首先用适当浓度的DNAseⅠ在探针DNA双链上造成缺口，然后再借助于DNa poly merasⅠ的5’→3’的外切酶活性，切去带有5’磷酸的核苷酸；同时又利用该酶的5’→3’聚酶活性，使32P标记的互补核苷酸补入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的这两种活性的交替作用，使缺口不断向3’的方向移动，同时DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。

优选的，添加特定标记的方法为，使用T4 RNA连接酶,将生物素标记在RNA的3’端，Laeger等通过缺口翻译法，在酶作用下标上生物素，使用含有生物素基的UTP类似物，在酶促反应下，将生物素掺入DNA。

优选的，添加特定标记的方法为，用高碘酸盐氧化的化学途径，将生物素连接到RNA的3’端，或用戊二醛使生物素标记的组的蛋白H，与单链的核交联上。

本发明还公开了一种利用基因检测探针的基因检测方法，包括以下步骤：

S1、收集目标细胞、组织活体1-1.5g，用7-9mL用7-9mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，提取样本RNA；