[发明专利]一种抗菌肽混合物及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201810146214.8 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN108220273B | 公开（公告）日： | 2019-01-29 |
| 发明（设计）人： | 姚云昕 | 申请（专利权）人： | 浙江艾格生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36;A61K38/47;A61P31/04 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自军 |
| 地址： | 313100 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鸡蛋溶菌酶 混合物 抗菌肽 制备方法和应用 碱性蛋白酶 抗菌活性 抑菌活性 酶解 分子生物学技术 金黄色葡萄球菌 纯化产物 分离纯化 酶解产物 制备工艺 粗提物 制备 应用 | ||
1.一种抗菌肽混合物的制备方法，其特征在于，包括：利用碱性蛋白酶对鸡蛋溶菌酶进行酶解得到粗提物，经分离纯化，收集具有抗菌活性的纯化产物，获得所述的抗菌肽混合物；
所述碱性蛋白酶为由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，碱性蛋白酶相对鸡蛋溶菌酶的添加量为0.06-1g/g；
酶解体系的pH值为9.0-11.0，酶解的温度为40-70℃，酶解结束后，利用超滤膜截留分子量≥500Da的酶解产物，得到粗提物；
采用离子交换层析进行分离纯化，包括以下步骤：
(1)取DEAE-sepharose F.F离子交换剂装入层析柱中，平衡；
(2)加入所述粗提物，再以0.1-0.5mol/L氯化钠溶液进行梯度洗脱，收集得到若干管洗脱产物，分别进行抑菌活性检测，合并抑菌活性大于鸡蛋溶菌酶抑菌活性的洗脱产物。
2.由权利要求1所述制备方法制备得到的抗菌肽混合物，其特征在于，包括：氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽Ⅰ、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多肽Ⅱ、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的多肽Ⅲ、氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的多肽Ⅳ、氨基酸序列如SEQID NO.5所示的多肽Ⅴ、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的多肽Ⅵ。
3.如权利要求2所述的抗菌肽混合物在制备抗金黄色葡萄球菌或大肠杆菌药物中的应用。
4.一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
5.如权利要求4所述的抗菌肽在制备抗金黄色葡萄球菌药物中的应用。
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