[发明专利]用于检测药物代谢酶基因SNP位点的成套引物及其应用

说明书

本发明公开了用于检测药物代谢酶基因SNP位点的成套引物及其应用，所述的成套引物包括人基因组DNA的7个药物代谢酶相关基因的9个SNP位点的扩增引物对和延伸引物。每个位点分别设计一对多重PCR扩增引物，和一条单碱基延伸引物，并采用MALDI‑TOF MS（基质辅助激光解析电离飞行时间质谱）法检测待测样本SNP位点分型。本发明建立一种基于基因分子分型的药物代谢酶基因的检测方法，可以在同一个反应内同一时间完成多个SNP分型，准确高效且成本低，其所涵盖的基因和位点关系到儿童常用8大类药物相关的代谢酶基因，是目前为止儿童安全用药基因检测产品中覆盖面最全的。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体来说，涉及用于检测药物代谢酶基因SNP位点的成套引物及其应用。

背景技术

我国现有3500多种药品制剂，其中儿童专用的仅有60多种。在这仅有的60多种儿童专用药中，也存在着很多错误使用的情况。因为用药不当，我国每年约有30000儿童陷入无声世界，造成肝肾功能、神经系统等损伤的更是难以计数。在中国，儿童用药中毒事件逐年上升，2014年已经达到73％。每8个儿童中就有1个因为用药不当发生不良反应，造成肝肾功能，神经系统损伤。

用药的安全主要与其药物代谢过程相关。如果药物在体内的代谢速度降低，将会引起药物在体内的堆积，从而出现不良反应。而药物在体内的代谢速率主要与药物代谢酶基因有关，药物代谢酶基因发生变异的个体，其药物在体内的代谢速率发生变化，是发生药物不良反应的主要内因。

参与药物代谢的酶以肝脏微粒体酶活性最高，主要是催化药物等外源性物质的代谢，所以又称药物代谢酶，简称药酶。主要为CYP1、CYP2、CYP3中7种重要的亚型：CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4、CYP3A5。个体的遗传基因不同，导致其酶活性变化，从表型上表现为不同个体对同一种药物的不同代谢能力。根据药物在体内代谢速度快慢可分为：1、快速代谢型；2、中间代谢型；3、慢代谢型；4、超慢代谢型。如果属于慢代谢型，药物代谢速率比普通人群明显减慢，应该避免使用该药物或更换其他有效药物，以减少药物不良代谢引起的药物蓄积性中毒的发生风险。

在药物代谢酶基因检测相关研究中，专利(CN200810208219.5)公开了一种药物代谢相关位点检测方法，专利(CN201610214241.5)公开了一种药物代谢酶相关基因SNP荧光标记复合物扩增试剂盒，这两个专利分别选择了4个相关基因的5个SNP位点，检测基因不全面，没有涵盖与药物代谢相关的所有关键酶基因和单核苷酸多态性位点；此外，以上两个专利及以往专利一般采用的方法都是荧光定量PCR法，该方法适合于检测5个左右的已知SNP位点，位点增加时，操作复杂，耗时长。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出用于检测药物代谢酶基因SNP位点的成套引物及其应用，使用MALDI-TOF MS法，能够在同一个反应内同一时间完成30个SNP分型，提高检测效率并降低成本；通过对儿童常用8大类药物(解热镇痛类、呼吸系统类、内分泌系统类、神经系统类、消化道系统类、心血管系统类、抗感染类、抗过敏类)相关的药物酶基因进行检测，了解儿童对不同类药物的代谢能力，为合理给药提供科学的参考依据。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

用于检测药物代谢酶基因SNP位点的成套引物包括人基因组DNA的7个药物代谢酶相关基因的9个SNP位点的PCR扩增引物对和单碱基延伸引物。

进一步的，所述的人基因组DNA的7个药物代谢酶相关基因为CYP1、CYP2、CYP3中7种重要的亚型：CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4、CYP3A5。