[发明专利]从天然树脂中提取活性成分的方法

说明书

本发明公开了从天然树脂中提取活性成分的方法，包括：预处理、高效液相色谱分离，将蜂胶经冷冻后粉碎，加入乙醇溶液后置于超声波清洗器中超声提取，收集提取液稀释后过微孔膜得滤液，将滤液经高效液相色谱分离得活性成分。本发明还公开了从天然树脂中提取出的活性成分作为一种人参活性成分的刺激物应用于人参培养。有益效果为：本发明方法不仅可以大大增强蜂胶中黄酮类活性成分的溶出，同时又可有效防止黄酮类物质的挥发与讲解，提高产物活性组分中黄酮物质的含量，提高提取效果与活性成分的含量，蜂胶活性成分可以刺激种胚细胞人参皂苷的合成，能够提高皂苷含量。

技术领域

本发明涉及天然树脂加工领域，尤其是涉及从天然树脂中提取活性成分的方法。

技术背景

天然树脂是指由自然界中动植物分泌物所得的无定形有机物质，这类物质种类繁多，来源于植物者，主要有松香、大漆、琥珀和玛树脂等；来源于动物者，主要有虫胶，它是紫胶虫的分泌物。天然树脂可根据树脂组分、树脂形成的历史进行分类。按照树脂的基本组分可分为三大类：纯树脂，即由萜类物质及粗香精油组成的树脂状物质。一般不溶于水，而溶于有机溶剂，如松香等；含树胶脂或称树胶树脂，是由多糖类物质组成，可溶于水或遇水溶胀，而不溶于醇及有机溶剂，如乳香等；含油树脂或称香胶，是指含有较多精油、能溶于油中的树脂。按树脂的形成历史可分为化石树脂、半化石树脂和新鲜树脂。后者是最重要的天然树脂来源。有些天然树脂由最早集运出口的港口名称得名，如玛树脂、柯巴树脂等。

天然树脂主要用作涂料（见天然树脂涂料），也可用于造纸、绝缘材料、胶粘剂、医药、香料等的生产过程；有些可作装饰工艺品的原料(如琥珀)；还有的如加拿大胶，其折光指数与普通玻璃相似，故作为显微镜等光学器材的透明胶粘剂。由于合成树脂的发展，天然树脂的应用日趋减少。

发明内容

本发明的目的在于提供从天然树脂中提取活性成分的方法，本方法操作简单，精度精良，可以使色谱峰获得较好的分离效果，提高活性成分的分离效果，可以大大增强蜂胶中黄酮类活性成分的溶出，同时又可有效防止黄酮类物质的挥发与讲解，提高提取效果与活性成分的含量，蜂胶活性成分可以作为一种人参活性成分的刺激物应用于人参培养。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：从天然树脂中提取活性成分的方法，包括：预处理、高效液相色谱分离，具体包括以下步骤：

预处理：将蜂胶样品放入冰箱，在-30～-40℃温度下冷冻60-90分钟，粉碎后过20-60目筛，称取蜂胶粉于容器中，加入15-20倍75-95%的乙醇溶液，置于双频率超声波清洗器中超声1-2小时，然后在42-46℃、120-150r/min水浴摇床中提取12-15小时，提取结束后，离心收集蜂胶提取液，然后稀释8-10倍，经0.20-0.22μm微孔膜过滤得滤液，待用；蜂胶为块状固体，温度过高会软化，过低会硬化，将其冷冻后粉碎便于操作，同时也更加容易被提取溶剂溶解；

高效液相色谱分离：将滤液经高效液相色谱分离，选用色谱柱的规格为250×4.6mm、5μm，柱温箱温度为33-35℃，检测波长为340nm与280nm，进样量为8-10u1，选用流动相为:B相为甲醇，A相为水；梯度洗脱程序如下：0-25min，22-36%B；25-55min，36-52%B；55-90min，52-63%B；90-115min，63-70%B；115-135min，70-75%B；135-150min，75-80%B；流速为1-1.5mL/min；收集洗脱组分合并即为活性成分；采用甲醇-水作为流动相可使各峰保留时间分离开来，因此容易洗脱，一步步调整洗脱的梯度浓度，可以使色谱峰获得较好的分离效果，提高活性成分的分离效果；蜂胶活性成分主要含有黄酮、酚酸及其酯类物质，其中酚酸及其酯类物质主要是肉桂型化合物，活性成分具有较强的生物学活性。