[发明专利]从天然树脂中提取活性成分的方法

权利要求书

1.从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述从天然树脂中提取活性成分的方法包括：

预处理：将蜂胶样品放入冰箱，在-30～-40℃温度下冷冻60-90分钟，粉碎后过20-60目筛，称取蜂胶粉于容器中，加入15-20倍75-95%的乙醇溶液，置于双频率超声波清洗器中超声1-2小时，然后水浴摇床提取，提取结束后，离心收集蜂胶提取液，然后稀释8-10倍，经0.20-0.22μm微孔膜过滤得滤液，待用；

高效液相色谱分离：将滤液经高效液相色谱分离，选用色谱柱的规格为250×4.6mm、5μm，柱温箱温度为33-35℃，检测波长为340nm与280nm，进样量为8-10u1，选用流动相为:B相为甲醇，A相为水；收集洗脱组分合并即为活性成分。

2.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述预处理步骤中的乙醇溶液中含有0.6-0.8‰的（S）-4-苄基-2-噁唑酮和0.1-0.12‰的（R）-4-苄基-2-噁唑酮。

3.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述预处理步骤中，双频率超声波的超声频率与声强密度分别为30-40kHz、0.35-0.45W/cm²与50-60kHz、0.45-0.60W/cm²，超声时溶液温度为23-25℃。

4.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述预处理步骤中，水浴摇床提取温度为42-46℃，摇床转速为120-150r/min，提取时间为12-15小时。

5.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述高效液相色谱分离步骤中，流动相B相甲醇中含有0.08-0.1%的甲酸，A相水中含有0.08-0.1%的甲酸。

6.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述高效液相色谱分离步骤中，梯度洗脱程序如下：0-25min，22-36%B；25-55min，36-52%B；55-90min，52-63%B；90-115min，63-70%B；115-135min，70-75%B；135-150min，75-80%B；流速为1-1.5mL/min。

7.根据权利要求1所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述蜂胶活性成分可以作为一种人参活性成分的刺激物应用于人参培养，具体操作步骤为：将人参种子灭菌消毒后去掉硬种皮外壳，解剖并取出胚，将取出的人参种胚置于预培养基上预培养，预培养条件为：每日日光灯光照12-14小时、室温24-26℃；培养15-18天后，将变成绿色的人参胚转到愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤，诱导培养条件为：黑暗、室温24-26℃；诱导培养50-60天后将诱导出的生长旺盛的愈伤组织分离出来，接种到新配置的继代培养基上培养，继代培养条件为:黑暗、室温24-26℃，在继代培养的第5-7天加入蜂胶提取分离物，添加量为0.3-0.4mg/100g培养基。

8. 根据权利要求7所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述人参种胚预培养基为：MS基本培养基、2-2.5mg/L 6-BA、0.5-0.6mg/L NAA、30-35g/L蔗糖、8-10‰琼脂，pH值为5.8-6.0。

9. 根据权利要求7所述的从天然树脂中提取活性成分的方法，其特征在于：所述继代培养基与愈伤组织诱导培养基组成为：MS基本培养基、3-3.2mg/L 2,4-D、2-2.2mg/L NAA、0.5-0.6mg/L 6-BA、30-35g/L蔗糖、6-8‰琼脂，pH值5.8-6.0。