[发明专利]PTH融合蛋白、其制备方法、含有其的检测试剂、试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种PTH融合蛋白、其制备方法、含有其的检测试剂、试剂盒及应用。该PTH融合蛋白包括：标签序列；以及PTH 1‑84位全长氨基酸序列，其中，标签序列位于PTH1‑84位全长氨基酸序列的C‑末端或N‑末端。通过采用具有标签序列的全长PTH融合蛋白，在与抗体结合时能提供更全面的结合区域，进而提高检测准确性。在此基础上，在本申请优选的实施例中，通过选择特定种类的稳定液，并通过优化各组分之间的含量比例，筛选得到上述全长PTH融合蛋白的稳定液。上述PTH融合蛋白在该稳定液中不仅可以在常温下以液态形式存在，而且能够长期稳定存在，不仅提高了临床检测检测的准确性，而且提高了检测的便利性。

技术领域

本发明涉及免疫检测试剂领域，具体而言，涉及一种PTH融合蛋白、其制备方法、含有其的检测试剂、试剂盒及应用。

背景技术

PTH(甲状旁腺激素)可用于诊断高、低钙血症的病因以及区分是否与甲状旁腺有关，还可监测甲状旁腺相关疾病的疗效。PTH通常与血钙联合检测，两者对于了解血钙平衡、甲状旁腺对血钙的反馈机制都有非常重要意义。若PTH与钙严重失衡或长期失衡，医生将采取治疗措施。

PTH由位于甲状腺后方的4个甲状旁腺产生。正常情况下，当机体出现低血钙时甲状旁腺将分泌PTH放入血循环。随后PTH通过可三条途径使血钙上升到正常水平，分别为促进骨骼释放钙；促进肾脏活化维生素D(活化维生素D可增加肠道对钙的吸收)；抑制钙从尿液排出(保钠排磷)。当血钙升高时，PTH的水平下降。当PTH由甲状旁腺释放入血液后，随即会裂解为多种片段(它的半衰期小于5分钟)。

PTH是一种由84个氨基酸组成(亦称PTH(1-84))的肽类激素，在骨代谢的调节中发挥重要的生理作用。PTH的生理功能主要是刺激肾对钙的重吸收、磷的分泌和骨的重建，导致合成和分解作用。临床上如果PTH的分泌量过高，血液中PTH浓度异常，会导致甲旁亢，从而引起骨的脱矿质化。如果PTH的活性片段在较低或中等液量的浓度下长时间作用于骨，则会刺激骨的形成，并且通过诱导骨中的合成作用而有效地治疗骨质疏松症。PTH还可通过细胞膜钙通道对心血管产生作用。研究表明PTH的活性中心位于N端的1-34氨基酸肽段，它通过与肾骨组织中专一性受体结合而发挥作用。

PTH不含半胱氨酸，在体内很不稳定，且含量低，其分离纯化困难。一些报道已经描述了在大肠杆菌中直接表达PTH的方法。如BreyeL和MoreLLe等人尝试在大肠杆菌中直接表达PTH，但由于RNA和蛋白质的不稳定性，因此其制备的PTH产量非常有限(500μg/L)。另外，Born等人使用前PTH原cDNA的多拷贝质粒实现了截短的PTH(主要是PTH(3-84)和PTH(8-84))的表达，但其几乎不含PTH生物活性。另外一种策略是采用融合蛋白的方法，但目前公开的大多是制备PTH(1-34)融合蛋白，且制备过程中涉及包涵体的提取、复性以及酶切等步骤，相对繁琐。此外，Forsberg采用IgG结合蛋白作为融合伴侣，在大肠杆菌中表达PTH(1-84)，最终得率可以达到5～8mg/L。上述重组表达的方法制备得到的PTH产品均需采用冻干的形式保存。

目前市场上存在的PTH定标品及质控品多采用冻干的方式才能长期保存，而冻干生产工艺复杂，使用需要复融，复融后也需要快速使用，不可长期放置，容易导致实验结果不准确。针对上述问题，目前还没有很好的解决方案。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种PTH融合蛋白、其制备方法、含有其的检测试剂、试剂盒及应用，以提供一种活性更优的PTH全长融合蛋白，从而提高PTH抗原临床检测的准确性。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种PTH融合蛋白，该PTH融合蛋白包括：标签序列；以及PTH 1-84位全长氨基酸序列，其中，标签序列位于PTH 1-84位全长氨基酸序列的C-末端或N-末端。