[发明专利]一种包含铁皮石斛纯化提取物的石斛营养粉及制备方法

权利要求书

1.一种包含铁皮石斛纯化提取物的石斛营养粉的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(1)从铁皮石斛叶中提取游离氨基酸；

(2)用提取的铁皮石斛游离氨基酸制备改性的慢消化淀粉；

(3)提取并纯化铁皮石斛多糖组分，所述多糖组分相对分子量大于150KDa；

(4)从提取多糖步骤的铁皮石斛脱脂液中提取并纯化石斛酚；

(5)配制浆料并构建石斛营养粉颗粒，其中所述的铁皮石斛多糖与石斛酚质量比为100:0.1-0.5；

其中，所述步骤(1)具体制备如下：

(a)将清洗并经杀青烘干粉碎后的铁皮石斛叶片粉末过100目筛，加入10-40倍质量的蒸馏水，于水浴振荡器中在50-60℃下浸提20-30min，浸提结束后，将浸提液趁热减压抽滤，收集滤液并冷却至室温；向滤液中加入0.5-1倍体积的无水乙醇、4℃下纯化处理6-18h以去除残余蛋白，以8000-9000r/min离心15-20min，取上清液，过滤，滤液减压浓缩，在50-60℃下真空干燥得氨基酸粗品；游离氨基酸粗品的提取含量为35-50mg/g；

(b)将上述氨基酸粗品用6-8倍质量的50-60％乙醇溶解，浓缩，采用真空蒸发结晶，得到精制的氨基酸晶体；

其中，所述步骤(2)具体制备过程如下：

1)将慢消化淀粉溶解于蒸馏水中，室温下搅拌制成质量分数20～40％的慢消化淀粉乳液；

2)向上述慢消化淀粉乳液中加入从铁皮石斛叶中提取的游离氨基酸晶体，室温下磁力搅拌20～30min，干燥至水分含量在50-60％；

3)将上述步骤所得产物放入密闭保温反应器中在55～60℃下保温处理10～16h；

4)将反应物取出，自然冷却至室温，真空干燥至水分含量小于10％，粉碎，过筛，即得铁皮石斛游离氨基酸改性的慢消化淀粉；

其中，所述步骤(3)具体制备如下：

1)制备石斛多糖粗品：将铁皮石斛茎干粉过60目筛，用8-10倍质量的 食品级95％乙醇浸泡30min后，回流脱脂1-1.5h；将脱脂产物粉末用15-20倍质量的蒸馏水溶解，然后水浴升温至50-55℃时添加石斛茎干粉质量1-2％的纤维素酶酶解1-2h，破坏细胞壁，充分释放多糖组分；然后将酶解液加热至90-95℃进行高温灭酶，然后保温30-60min，每间隔5min采用超声提取1-2min，过滤收集滤液；将滤渣加10倍质量蒸馏水，加热至90-95℃，并保温40-60min，每间隔5min超声提取1-2min，过滤，合并滤液，将滤液经旋转蒸发仪真空浓缩至十分之一体积，向上述浓缩液中加入3-4倍体积无水乙醇，于0-4℃或冰浴静置12-24小时沉淀多糖，过滤，并用75％的食用级乙醇洗涤沉淀，沉淀经烘干粉碎制得含蛋白的多糖粗品；取上述多糖提取物粗品溶于20-50倍质量水中，加入20-25％体积比的Sevag试剂，Sevag试剂由异戊醇：氯仿为1：4配制而成，超声震荡3-5min后，于常温下3000-4000r/min离心15-20min，取上清重复上述超声震荡-离心操作3-4次；向上清液加入3-4倍体积乙醇，冰浴放置10-12小时，过滤，收集沉淀物并用无水乙醇洗涤，蒸除溶剂，真空干燥得石斛多糖粗品；

2)纯化多糖： 取上述石斛多糖粗品溶于水中，用截留分子量4000Da的透析膜透析24-48h除单糖及寡糖后，取出透析袋内液体经10000-12000rpm离心10-15min，浓缩上清液，冷冻干燥，获得石斛多糖预制品；将上述多糖预制品用具分子筛效应的丙烯葡聚糖柱色谱或通过NaCl阶段洗脱的DEAE-52纤维素离子交换柱进行分离纯化，收集主峰组分，合并浓缩150KDa以上的多糖组分，加入适量乙醇，冰浴放置12h，过滤，收集沉淀物并用无水乙醇洗涤，沉淀冷冻干燥，制得所述的铁皮石斛多糖精品；

其中，所述步骤(4)具体制备如下：

收集上述制备石斛多糖中的回流脱脂步骤的乙醇萃取组分，减压浓缩，以正己烷萃取2-3次，再以乙酸乙酯萃取3-4次，蒸除滤液而得到石斛酚粗浸膏；加入20％碳酸钠溶液搅拌反应2-3小时，放置4-12小时，高速离心收集上清液，浓缩，充入纯净二氧化碳酸化1-2小时，得白色絮状沉淀，离心取沉淀，并用蒸馏水清洗两遍；将沉淀加入乙醇至恰好完全溶解，以2-3BV/h上反相硅胶柱进行吸附分离，以水-乙醇系统梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集石斛酚段洗脱液，减压浓缩得石斛酚粗品，用无水乙醇结晶，并重结晶2-3次，得白色石斛酚晶体；其中，所述的石斛酚粗浸膏与碳酸钠溶液的质量用量比例为1：10-20；

其中，所述步骤(5)具体制备如下：

1)将制备的石斛氨基酸改性慢消化淀粉加入蒸馏水配制15-30wt％的淀粉乳液，磁力搅拌器上匀速搅拌至均匀，边搅拌边加入海藻糖、结冷胶以及上述步骤制得的石斛多糖、石斛酚，搅拌均匀后用均质机均质，其中混合后的石斛多糖、石斛酚、海藻糖以及结冷胶的含量为：石斛多糖5-15wt％，海藻糖2-3wt％，结冷胶0.1wt％，石斛酚用量为石斛多糖的0.1-0.5wt％；将均质后的混合液静电喷雾干燥，制得凝胶颗粒粉料；

2)向3-5wt％的海藻酸钠溶液中加入羟丙甲基纤维素、甜菊糖甙、壳聚糖，均质搅拌均匀，制得粘性浆料，其中各原料的质量百分含量为：海藻酸钠3-5wt％，羟丙甲基纤维素1-3wt％，甜菊糖甙0.1-0.3wt％，壳聚糖0.1-0.2wt％；用喷涂干燥机将所述粘性浆料均匀喷涂在上述凝胶颗粒粉料表面，从而制得所述的包含铁皮石斛纯化提取物的石斛营养粉。

2.根据权利要求1所述制备方法制得的包含铁皮石斛纯化提取物的石斛营养粉。