[发明专利]一种赤霉酸异构化合物及其应用

权利要求书

1.一种制备赤霉酸异构化合物A的方法，其特征在于，所述赤霉酸异构化合物A的分子结构式如式Ⅰ所示：

所述制备赤霉酸异构化合物A的方法包括以下步骤：

(1)制备啤酒麦芽、麦汁

微型制麦：称取大麦，采用“浸四断八浸四断八浸四”工艺，制备麦芽；

麦汁制备：将麦芽粉碎后，加水糖化，糖化结束后，将麦醪过滤，过滤结束后用热水洗糟，合并滤液和醪液后，进行麦汁煮沸；

(2)赤霉酸异构化物A的制备

a.取煮沸后的麦汁，蒸发浓缩至原麦汁体积的十分之一，然后加入原麦汁体积的十分之四的乙腈，乙腈的比例为80％，均质提取一段时间后抽滤，用浓度为80％的乙腈洗涤滤渣，抽滤后合并两次滤液，加入25g/100mL原麦汁的NaCl，震荡一段时间，于分液漏斗中静置，至明显分层，弃水相，将所得提取液于40℃下浓缩至干后用超纯水溶解、甲酸调pH至2.5后得到预处理样品备用；

b.在进行制备色谱上样分析前，先取上述预处理样进行LC-MS检测分析，分析仪器：Agilent 1200HPLC System/6110MS；色谱柱：Waters sunfire，50×40mm，3.5μm；柱温：50℃；流动相A：水+0.01％TFA，流动相B：乙腈+0.01％TFA；流速：2.0mL/min；检测波长：214nm；梯度洗脱：0.0min，95％A+5％B-1.2min，5％A+95％B-2.5min，95％A+5％B；根据LC-MS液相色谱离子流图确定赤霉酸异构化物A的保留时间；

c.制备色谱实验：取上述a中预处理样品用于制备赤霉酸异构化物A，仪器为：Gilson281；色谱柱：Waters sunfire，150×30mm，5μm；流动相A：水+0.01％TFA，流动相B：乙腈；流速：30mL/min；检测波长：214nm；梯度洗脱：0.0min，90％A+10％B～11.0min，60％A+40％B～15.0min，5％A+95％B～15.2min，95％A+5％B～18.0min，95％A+5％B，收集各段洗脱液，分别按照b中的分析条件进行LC-MS检测，进而确定赤霉酸异构化物A的洗脱峰，于室温旋蒸除去乙腈，然后冷冻干燥过夜，得到纯化固体粉末，即为赤霉酸异构化物A。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)：

微型制麦：称取1000g大麦，采用“浸四断八浸四断八浸四”工艺，浸麦和断水温度均为18℃，在恒温恒湿培养箱中进行， 发芽温度控制在16℃，湿度保持为95％，当叶芽长度为麦粒长的3/4时停止发芽；然后在电热恒温鼓风干燥箱中采用梯度升温的方法进行焙燥：首先在35℃下鼓风排潮24h，使水分含量在20％以下，然后55℃下干燥5h，使水分降至8％-12％，最后将温度提高至85℃，焙焦3h，使水分控制在2％-5％；干燥后的麦芽通过摩擦使根芽脱落；

麦汁制备：将称取的麦芽在粉碎机上粉碎，48℃投料，麦芽与水的料液比为1:6，在48℃下保温30min，后升温至63℃保温60min，然后升温至72℃保温20min，保温结束后碘试不显色即将温度升至78℃保温10min，糖化阶段结束，将麦醪过滤，过滤结束后用热水洗糟；合并滤液和醪液后，进行麦汁煮沸。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a：取煮沸后的麦汁100mL，在40℃下用旋转蒸发仪器浓缩至10mL，然后加入40mL乙腈，使乙腈的比例为80％，均质提取30min， 抽滤，用10mL浓度为80％的乙腈，洗涤滤渣，抽滤后合并两次滤液，加入25g NaCl，震荡15min，于分液漏斗中静置10min至明显分层，弃水相；将上述提取液于40℃下浓缩至干后加1.0mL超纯水，并用甲酸调pH至2.5，溶解得到预处理样品备用。