[发明专利]用于糖蛋白检测的硼酸盐及制备该硼酸盐的方法

权利要求书

1.用于糖蛋白检测的硼酸盐，其特征在于，具体为6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基异硫氰酸荧光素苯硼酸盐，其化学结构式如下：

2.权利要求1所述用于糖蛋白检测的硼酸盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐反应制得4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素，然后将所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素与间氨基苯硼酸反应制得6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基异硫氰酸荧光素苯硼酸盐。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚通过2-氯代香兰素和双氧水反应制得。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚的制备方法，包括如下步骤：将2-氯代香兰素溶于二氯甲烷中,冷却到-5℃～0℃，加入二氧化硒和双氧水，在15℃～20℃下充分反应，然后将反应液倒入亚硫酸氢钠水溶液中，分液并干燥，将有机相浓缩至干并溶于盐酸甲醇溶液中，再浓缩至干，经重结晶后得到所述2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，2-氯代香兰素和双氧水的摩尔比为1：3，二氧化硒的用量是2-氯代香兰素摩尔用量的8％。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，将2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐溶于甲磺酸中，然后加入无水四氯化锡并加热到80℃-90℃，充分反应后冷却到室温，将反应液倒入到冰水中，收集析出的固体，然后用柱层析纯化分离，分别得到4,5-二氯-2,7-二甲氧基-5-硝基-荧光素和4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-荧光素；

步骤二，将4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-荧光素还原为4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-氨基-荧光素；

步骤三，将4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-氨基-荧光素中的氨基转换为异硫氰基，得到4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐的摩尔比为2：1；2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和无水四氯化锡的摩尔比为2：1。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤二中，通过加入硫化钠和硫氰化钠，将4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-荧光素中的硝基还原为氨基；步骤三中，通过加入二硫化碳反应得到所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素。

9.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基异硫氰酸荧光素苯硼酸盐的制备方法，包括如下步骤：将4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素和间氨基苯硼酸溶于D,D-二甲基甲酰胺中并冷却到-5℃～0℃,加入三乙胺充分反应，然后将反应液纯化后得到6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基异硫氰酸荧光素苯硼酸盐。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素和间氨基苯硼酸的摩尔比为3：5；4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-异硫氰基-荧光素和三乙胺的摩尔比为1：2。