[发明专利]一种提高葡萄糖氧化酶热稳定性的方法

权利要求书

1.一种稳定性提高的葡萄糖氧化酶，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶在N端融合表达了双亲短肽。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶，其特征在于，所述双亲短肽的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.一种融合双亲短肽葡萄糖氧化酶表达菌株的构建，其特征在于，所述方法的步骤如下：

(1)将葡萄糖氧化酶的基因与载体连接，扩增双亲短肽；

(2)线性化载体和要插入的短肽的序列利用一步克隆法进行同源重组，得到重组质粒；

(3)将重组后的质粒线性化后转化至宿主细胞。

5.根据权利要求4所述的葡萄糖氧化酶，其特征在于，所述质粒为pPIC9K。

6.根据权利要求4所述的葡萄糖氧化酶，其特征在于，所述宿主为毕赤酵母。

7.一种葡萄糖氧化酶的制备方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：

(1)将权利要求5所述的融合双亲短肽葡萄糖氧化酶表达菌株活化得到种子液，将种子液按8-12％接入5BMGY培养基中，在28-30℃、200-240r/min条件下培养20-28h，发酵液离心，去除上清液，将全部菌体转入到BMMY培养基中；

(2)BMMY培养基初始甲醇添加量为体积分数1-3％，在28-30℃、200-240r/min条件下诱导产酶，之后每24h添加体积分数为1-3％的甲醇。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述BMGY培养基的成分10g/L酵母膏，20g/L蛋白胨，10g/L甘油，0.1mmol/L pH 6.0磷酸缓冲液，13.4g/L YNB，0.4mg/L生物素。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述BMMY培养基的成分10g/L酵母膏，20g/L蛋白胨，10g/L甲醇，0.1mmol/L pH 6.0磷酸缓冲液，13.4g/L YNB，0.4mg/L生物素。

10.权利要求1所述的葡萄糖氧化酶在食品工业、生物传感器、酶生物燃料电池上的应用。