[发明专利]一种基于病原相关分子模式蛋白鉴定具有分泌功能信号肽的方法

权利要求书

1.一种基于病原相关分子模式蛋白鉴定具有分泌功能信号肽的方法，其特征在于，

利用分泌蛋白XEG1在植物细胞外引起细胞死亡的特点，将待检测信号肽和XEG1去信号肽部分融合，在植物细胞中表达并观察是否引起坏死，从而快速高效的检测信号肽是否具有分泌功能；

该方法包括以下步骤：

(1)将待鉴定信号肽与病原相关分子模式蛋白无信号肽的C端融合，构建表达载体；

所述病原相关分子模式蛋白为大豆疫霉XEG1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述表达载体为植物瞬时表达载体；

(2)将步骤(1)构建的表达载体转化感受态细胞，所述感受态细胞为农杆菌感受态；

(3)将步骤(2)的感受态细胞注射入植物细胞中，观察注射位点坏死情况，若注射位点植物细胞坏死，则待检测信号肽具有分泌功能，若注射位点植物细胞无坏死，则待检测信号肽不具有分泌功能。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述植物为烟草、马铃薯、番茄、辣椒。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括设立阳性对照，所述阳性对照是在步骤(1)阶段，将大豆疫霉无毒效应蛋白Avr1b的信号肽连接病原相关分子模式蛋白无信号肽的C端构建表达载体得到。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，阳性对照为将氨基酸序列如SEQ ID NO.3所述的Avr1b的信号肽连接氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示大豆疫霉XEG1的无信号肽的C端构建植物瞬时表达载体得到。

5.权利要求1-4任一所述的方法在筛选具有分泌功能信号肽中的应用。

6.权利要求1-4任一所述的方法在制备转基因植物中的应用。