[发明专利]一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法

权利要求书

1.一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a) 清洗鱿鱼皮，沥干水分，匀浆后按一定的料液比加入去离子水，搅拌均匀，并调节pH值到7.5～8.5 ；

b) 加入鱿鱼皮质量0.4～0.6％的蛋白酶，混匀后在50～60℃条件下水解80 ～100min，得到鱼皮酶解液；

c）超滤：将鱼皮酶解液加入超滤系统，用10KD、5KD、3KD的超滤膜进行超滤，收集>10KD、10-5KD、5-3KD和<3KD分子量的酶解液；

d）将酶解液用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析和缓冲液洗脱，收集各峰后，取有生物活性的峰再用反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化；

e）经过反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化及氨基酸序列检测，获得小分子胶原低聚十肽的胶原蛋白粉产品。

2.根据权利要求1所述的鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法，其特征在于：

所述的步骤d）中，所述的凝胶柱层析和缓冲液洗脱是：PH8.5Tris-HC1 缓冲液，0 ～0.03mol/NaCl 梯度洗脱，收集有活性的各峰，冻干后，凝胶柱脱盐；

所述的步骤e）中，所述反相高效液相色谱(RT- HPLC)：即用RT-HPLC进行纯化，色谱条件:

1)样品前处理:将样品用0.06%TFA的水溶解到0.6ml，离心（12000-14000RPM，离心10分钟）取上清；

2)系统: Agilent 1260 HPLC；

3)柱子:ZorbaxSB-C18 4.6X250 5um；

4)进样体积:80-100ul；

5)缓冲液、平衡缓冲液: 0.06%TFA洗脱缓冲液: 0.05%TFA的乙腈；

6) 梯度:0%–0 % B洗脱4分钟，0%–8% B洗脱25分钟，8%-100%B洗脱1分钟，100% -100%B洗脱5分钟；

7)流速:1.0 ml/min；

8）检测:280nm/214nm。