[发明专利]用于胎儿游离DNA检测的血浆常温运输方法

说明书

技术领域

本发明属于血浆游离核酸测序领域，更具体地，涉及一种血浆常温运输处理方法及其应用。

背景技术

1997年，香港中文大学的卢煜明教授发现了孕妇外周血中存在胎儿游离DNA，从此开创了无创产前基因筛查(Noninvasive Prenatal Testing，NIPT)的新时代。目前，基于孕妇外周血样本和高通量测序技术，无创胎儿染色体非整倍体筛查，无创胎儿染色体微缺失微重复筛查已应用于临床服务，无创胎儿单基因病筛查技术在研发和样本积累验证阶段。相对于传统的有创筛查/诊断技术，如羊膜腔穿刺、绒毛活检、脐静脉穿刺等，基于高通量测序的无创产前基因筛查具有无创取样，无流产风险，高灵敏度，高准确率(99％以上)，检测周期短等优势，对普及孕妇产前筛查和提高出生人口素质的具有重要意义。

NIPT检测样本为孕妇外周血，由于母源血细胞基因组DNA的释放会影响胎儿游离DNA的比例，因此需及时将血细胞与血浆进行分离，以血浆作为检测样本进行DNA提取、文库构建、基因测序和信息分析。血浆中胎儿游离DNA浓度是NIPT检测的重要质控指标，胎儿DNA浓度越高，则NIPT检测的准确性越高。对NIPT而言，胎儿DNA浓度过低会提高阳性样本漏检的风险。因此，孕妇外周血和血浆中胎儿游离DNA浓度的维持和避免母体DNA的增加导致胎儿游离DNA浓度下降对基于胎儿游离DNA的无创产前筛查尤为重要。

由于条件、资源和资质的关系，NIPT检测采样点和检测点往往非同一地区，检测样本需运输至检测点进行检测。目前，采集孕妇外周血往往是根据实际情况选择抗凝采血管或游离核酸稳定管，其中使用EDTA抗凝采血管采集后需4℃保存，并要求8小时内送达实验室进行血浆分离；如果使用价格比EDTA抗凝采血管贵十几倍到几十倍不等的游离核酸稳定管，例如Streck cfDNA BCT采血管，则可常温保存和常温运输，但仍需在72～96小时内送达实验室进行血浆分离，由于物流运输时间的不稳定性及运输过程中的机械碰撞或摇晃，外周血样本往往会存在因运输超时或运输机械力导致的溶血情况，需重新采集外周血。

一直以来，已完成血浆分离的血浆样本如需运输至检测点，须依赖高成本的冷链物流运输或干冰保温运输，然而物流运输受地理、节假日和天气的影响，常存在运输时间超时导致冷链或干冰运输温度失控的情况，同时干冰价格偏贵，增加检测成本。

针对上述问题，本发明提供一种血浆常温运输处理方法，将血浆样本的运输方式拓展至常温，降低样本处理成本，可用于基于孕妇外周血血浆胎儿游离DNA的无创产前筛查技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血浆常温运输处理方法及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种血浆常温运输处理方法，包括如下步骤：

(1)采集外周血；

(2)从外周血中分离血浆；

(3)将血浆装入无菌无核酸酶的装置中，密封，即可进行常温运输。

作为上述方法的优选，步骤(1)中，外周血采集至抗凝采血管或游离核酸稳定管。

作为上述方法的优选，所述抗凝采血管选自EDTA抗凝管，但不限于此，添加有其他抗凝成分的抗凝采血管同样适用。

作为上述方法的优选，所述游离核酸稳定管选自Streck Cell-Free DNA BCT采血管、万基生物的Cell Free DNA保存管、国盛医学的Ardent血浆游离DNA保鲜采血管、康为世纪的游离DNA样品保存管、美岸生物的cfDNA保存管，但不限于此，其他性能相近的外周血游离核酸稳定管同样适用。

作为上述方法的优选，分离血浆采用离心法。

作为上述方法的优选，离心法的具体步骤为：将外周血4℃下1600g离心10～15min，吸取上清，将上清4℃下16000g离心10～15min，所得上清即为血浆。

作为上述方法的优选，所述装置选自EP管或玻璃管。

作为上述方法的优选，常温运输的保质期不超过10天。

作为上述方法的优选，常温运输的温度不超过45℃。

上述用于血浆常温运输处理方法应用于胎儿游离DNA检测产品、无创胎儿染色体非整倍体筛查产品、无创胎儿染色体微缺失微重复筛查产品、无创胎儿单基因病筛查产品。

本发明的有益效果是：