[发明专利]一种柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞标记的应用及方法

权利要求书

1.一种柠檬酸基荧光纳米粒，其特征在于，其制备过程包括以下步骤：

（1）制备聚（柠檬酸-硅氧烷）高分子材料：将1, 8-辛二醇、柠檬酸、3-氨基丙基三乙氧基硅烷加入反应装置中，在氮气保护下，在搅拌下加热至155-165℃，待1, 8-辛二醇、柠檬酸均熔化后，在130-150℃下反应0.5-1.5h，得到聚合物，将聚合物水洗、冷冻干燥，得到聚（柠檬酸-硅氧烷）高分子材料；

（2）将步骤（1）得到的聚（柠檬酸-硅氧烷）高分子材料加入二甲基亚砜中，室温下用磁力搅拌器搅拌溶解；

（3）将步骤（2）中的聚（柠檬酸-硅氧烷）溶液逐滴加入聚乙烯醇溶液中，在一定的速度下搅拌；

（4）将步骤（3）得到的混合物进行离心，对沉淀物进行洗涤和冷冻干燥，得到光致发光柠檬酸基纳米粒。

2.根据权利要求1所述的柠檬酸基荧光纳米粒，其特征在于：步骤（1）中，1, 8-辛二醇、柠檬酸、3-氨基丙基三乙氧基硅烷的摩尔比为0.9~1.1:1:0.2-0.5。

3.根据权利要求1所述的柠檬酸基荧光纳米粒，其特征在于：步骤（3）中，聚乙烯醇的浓度范围为0.5%~2%，其溶解温度范围为75℃~100℃，搅拌速度为100~300 rpm。

4.根据权利要求1所述的柠檬酸基荧光纳米粒，其特征在于：离心速度为10000 rpm~15000 rpm，离心时间为30分钟；离心所得到的沉淀物使用去离子水洗涤3次，然后将其在-80℃的冷冻干燥机中干燥24小时。

5.权利要求1-4任一项所述的柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞荧光标记的应用。

6.一种权利要求1-4任一项所述的柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞荧光标记的方法，其特征在于，过程如下：将活细胞接种于培养装置中，加入含胎牛血清的培养基于培养箱中培养，然后将培养基更换为含光致发光柠檬酸基纳米粒的新鲜培养基，继续孵育，即可实现对活细胞的荧光标记。

7.根据权利要求6所述的柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞荧光标记的方法，其特征在于：所述活细胞为脂肪干细胞或人肝癌细胞。

8.根据权利要求6所述的柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞荧光标记的方法，其特征在于：所述光致发光柠檬酸基纳米粒浓度为30~300 μg/mL。

9.根据权利要求6所述的柠檬酸基荧光纳米粒用于活细胞荧光标记的方法，其特征在于：将培养基更换为含光致发光柠檬酸基纳米粒的新鲜培养基，继续孵育0.5h~24h。