[发明专利]一种快速选择携带qSBRLEYD4A基因的抗纹枯病水稻的方法

说明书

本发明公开了一种快速选择携带qSBRLEYD4A基因的抗纹枯病水稻的方法。该方法是利用D467标记PCR扩增Lemont和扬稻4号组配的重组自交系分离群体内的不同株系，选择带型与亲本扬稻4号一致的株系即是携带qSBRLEYD4A纹枯病抗性等位基因的株系。该方法相比传统的田间接种鉴定方法更简便快速，无需接种鉴定即可选出携带qSBRLEYD4A基因抗纹枯病水稻材料，选择的准确度比田间接种方法更高，可大大提高育种效率。

技术领域

本发明涉及一种利用D467标记快速选择携带qSBRLEYD4A基因的抗纹枯病水稻的方法，该方法可利用D467标记快速选出抗水稻纹枯病的稳定株系。

背景技术

水稻是关乎我国粮食安全的重要粮食作物。我国水稻育种界选育纹枯病抗病水稻的传统方法都是通过表型选择进行的，即用纹枯病致病菌在不同的水稻发育时期对水稻单株进行接种鉴定。由于传统的接种鉴定大部分是在田间种植条件下进行的，接种鉴定的结果误差大，准确性差，而且不同年份的接种结果存在差异，导致接种鉴定结果的准确率低。通过分子标记对水稻纹枯病抗性相关基因进行选择可以在水稻苗期即对纹枯病抗性进行选择，选择的准确率高，可以大大提高育种效率。水稻的纹枯病抗性是一个数量性状，受多个数量性状基因座位(QTL)控制。为了有效的提高育种效率，加快育种进程，本发明提出一种利用D467标记快速选择携带qSBRLEYD4A基因的抗纹枯病水稻的方法。本发明相比传统的利用纹枯病致病菌进行接种鉴定的表型选择方法更简便快速，无需进行传统的纹枯病菌接种鉴定，而且相比接种鉴定方法的准确度更高，因此大大提高了育种效率。

发明内容

本发明包括以下步骤：

(1)将水稻品种Lemont作为母本与水稻品种扬稻4号作为父本进行杂交，并构建重组自交系分离群体Fn，Fn中的n≥5；

(2)用D467分子标记PCR扩增步骤(1)获得的重组自交系分离群体内的不同株系的叶片DNA，根据D467标记与水稻第4染色体上的纹枯病抗性基因qSBRLEYD4A连锁的特点，将D467标记的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，选出与亲本扬稻4号带型相同的株系即是携带qSBRLEYD4A纹枯病抗性QTL的抗纹枯病水稻株系。

进一步地，所述步骤(2)中，D467标记并非等同于qSBRLEYD4A纹枯病抗性基因，由于D467标记与qSBRLEYD4A基因紧密连锁，可以通过D467标记检测快速获得携带qSBRLEYD4A纹枯病抗性QTL的抗纹枯病水稻株系，qSBRLEYD4A基因座位的纹枯病抗性等位基因来自亲本扬稻4号；该方法比传统的纹枯病菌接种鉴定方法更简便快速，无需接种鉴定即可准确选出携带qSBRLEYD4A基因的抗水稻纹枯病的稳定株系。

具体实施方式

实施例1：在水稻品种Lemont和水稻品种扬稻4号杂交组配的F6代分离群体中，D467标记的应用。

1.将水稻品种Lemont作母本，与水稻品种扬稻4号作父本进行杂交并构建F6代分离群体(Lemont为来自美国的粳稻品种，扬稻4号为来自江苏的籼稻品种，Lemont和扬稻4号由中国水稻研究所国家水稻种质资源中期库提供)，这个包括219个株系在内的F6分离群体于2013年5月播种在杭州市富阳区中国水稻研究所试验场。

2.利用标记D467对这个219个株系的分离群体内的每一株系进行PCR检测，利用标记D467与基因qSBRLEYD4A连锁的特点，可检测出哪个株系在qSBRLEYD4A座位携带扬稻4号的抗病等位基因(用D467标记扩增扬稻4号的带型来追踪qSBRLEYD4A座位的扬稻4号抗病等位基因)；哪个株系在qSBRLEYD4A座位携带Lemont的感病等位基因(用D467标记扩增Lemont的带型来追踪qSBRLEYD4A座位的Lemont感病等位基因)。

3.选择携带不同等位基因的株系以获得平均病斑长度、平均病级不同的水稻材料(表1)。