[发明专利]一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法

权利要求书

1.一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

(1)农产品汽爆处理：准确称取20-30g农产品，先用纯水清洗1-2次，去除表面杂质，将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.3-0.5混合后装入汽爆罐中，利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽，控制汽爆罐内温度在35-40℃，静置预分解10-15min；将所述碱性水蒸汽梯度升温，并间歇梯度通入惰性气体维持压力在1-2kpa内，进行汽爆处理12min，打开放气阀，迅速放气，并利用冷凝回收装置回收冷凝液，隔氧保存待用；所述复合酶解液按照质量百分比计包括：1.2-2.4％碱性蛋白酶、1.4-2.6％蛋白酶K、7.5-8.9％α-淀粉酶、4.0-4.6％果胶酶、3.5-4.1％木聚糖酶、0.5-1.2％微生物酶、12.3-15.6％纤维素酶，余量为磷酸缓冲液；所述惰性气体间歇梯度通入的工艺参数为：第1-4min，惰性气体流速为15-20m/s，通气间隔为3-5s；第4-8min，惰性气体流速为10-14m/s，通气间隔为6-8s；第8-12min，惰性气体流速为3-8m/s，通气间隔为10-12s；

(2)农产品浆液处理：将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中，并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗，并将清洗后的液体加入所述离心管中，与农产品浆液进行混合，再加入20-30ml乙腈、2.5-3g氯化钠、4-6g无水硫酸镁，搅拌均匀，在40-50℃的水浴下进行均质提取3-5min，最后以7000r/min离心10min，分离得到上清液；

(3)定容过滤：将所述上清液和冷凝液进行混合，得到混合液，加入盐酸调节pH至4-6，加入与所述混合液质量比为1:2净化微球，振荡混合2min，再以5000r/min离心3min，取上层清液，并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至3-5ml,过0.22um滤膜，得到精滤液；

所述净化微球按照质量百分比计包括：3.5-5.1％硅酸镁、5.1-6.3％纳米有机蒙脱土、6.0-7.4％明胶、11.6-12.8％纳米硅酸凝胶、5.8-6.9％微晶纤维素、6.8-9.2％木质素磺酸钠、5.3-6.5％炭黑、2.5-5.4％乳化剂、13.4-15.5％疏水性有机溶剂、0.3-0.6％成孔剂，余量为去离子水；

所述净化微球的制备方法包括以下步骤：

S1：将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中，混合均匀后，得到油相；

S2：将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中，经过漩涡振荡2min和超声分散3min，得到悬混液，得到水相；

S3：将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂，机械搅拌1-15min形成乳状液；

S4：将所述乳状液加入到预热至100℃-120℃的反应容器中，通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎；

S5：在S4得到的乳状液中加入所述明胶，机械搅拌均匀，并通过微波加热至明胶完全溶解，得到乳胶体；

S6：将所述乳胶体进行超声冷却，使乳胶体固化，分离后得到粒径为0.1-0.5mm的净化微球。

(4)使用液相色谱仪检测：

A)标准溶液的配制：取标准储备溶液，用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0，0.1，0.2，0.5，0.8，1.0ug/ml的标准工作液；

B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液；

(5)结果分析：根据称取的农产品质量及检测的浓度利用公式计算出农产品中二甲戊灵的含量；所述公式为：其中，W为农产品二甲戊灵的含量,mg/kg；c精滤液中二甲戊灵浓度，mg/L；V为定容体积,mL；m为称取农产品的质量，g。

2.如权利要求1所述的一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法，其特征在于，所述惰性气体为氮气、氩气、氦气任意一种。

3.如权利要求1所述的一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法，其特征在于，所述梯度升温的工艺参数为：第一步，先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以5-10℃/min的速度升至60-65℃，保持1-2min，灭活酶的活性；第二步，再将汽爆罐内温度以20-25℃/min的速度升至150-160℃，进行汽爆处理。