[发明专利]包含rhAnnexin V-128的冻干组合物、它们的制备方法及其用于制备含有99mTc-rhAnnexin V-128的制剂的用途

说明书

描述了包含冻干的rhAnnexin V‑128的组合物，其适于制备用于静脉内施用的^99mTc‑rhAnnexin V‑128制剂。

技术领域

本发明涉及标记的化合物，尤其涉及锝标记的重组蛋白Annexin V-128。

背景技术

rhAnnexin-V-128是已知的重组蛋白，其序列为(SEQ ID NO:1):

Jin M.等在Essential Role of B-helix Calcium Binding Sites in AnnexinV-Membrane BindingThe Journal of Biological Chemistry-Vol.279-No.39-pp.40351-40357(2004)中描述了该重组蛋白，其是天然存在的人血清蛋白Annexin V的突变体形式，其中在rhAnnexin V(是指野生型人Annexin V)的N末端添加了6个氨基酸(Ala-Gly-Gly-Cys-Gly-His)以形成内源^99mTc结合位点。

此外，第316位的半胱氨酸已经突变为丝氨酸(参见上文序列中带下划线的S)；具有该突变，rhAnnexin V-128序列中剩余的唯一半胱氨酸是位于N末端^99mTc结合位点中的第4位的半胱氨酸。

rhAnnexin V-128通过已知的重组技术在大肠杆菌中产生(参见例如Jin M.等Essential Role of B-helix Calcium Binding Sites in Annexin V-MembraneBindingThe Journal of Biological Chemistry-Vol.279-No.39-pp.40351-40357(2004))，并以冷冻形式储存。

如上所述，在N末端引入的修饰允许该蛋白结合^99mTc以形成相应的标记蛋白，借助于其作用机制，所述标记蛋白作为诊断工具以及用于监测治疗效率具有广泛的潜在应用，并且所述标记蛋白通常通过静脉内施用来使用。

最有趣的适应症是在风湿病学、心血管疾病、肿瘤学、移植物排斥，自身免疫疾病、神经病学领域，但是对细胞凋亡过程作为标志的其他病理也有空间。关于心血管疾病，特别是主动脉瘤，可以考虑化疗心脏毒性和动脉粥样硬化。

还考虑其他适应症，例如移植物排斥、自身免疫疾病(除了类风湿性关节炎，例如炎性肠病......)或神经退行性疾病。

然而，由于各种问题，^99mTc-rhAnnexin V-128的制备相当复杂。

由于在两个半胱氨酸之间形成二硫键，rhAnnexin V-128中存在的半胱氨酸容易导致二聚化，从而降低制剂的化学纯度。此外，蛋白质经历蛋白质聚集，这是错误折叠的蛋白质聚集的物理现象。

应该注意的是，rhAnnexin V-128经历几个压力过程步骤(冻融、大量配制、冻干)，以及用放射性^99mTcO₄^-溶液长期储存和重构，在此期间可能发生聚集。由于这些原因，化学纯度是在该制备中必须仔细监测的一个分析参数。

放射化学纯度也是放射性药物的关键参数。出于安全原因以及技术/诊断性能两者，这一点至关重要。用^99mTcO₄^-标记通过涉及REDOX反应和反式螯合的一系列反应/平衡发生，并且如果条件不是最佳，可能形成若干放射化学杂质。