[发明专利]单价不对称串联Fab双特异性抗体

说明书

本发明提供可以结合两个表位或两个抗原的单价、不对称串联Fab双特异性抗体，包含该抗体的组合物、该抗体的用途、制备该抗体的方法、编码该抗体的核酸和包含该核酸的宿主细胞。

发明领域

本发明涉及工程化双特异性抗体、其组合物以及制备和使用这样的双特异性抗体的方法。

发明背景

过去五十年来在新形式抗体工程化方面的努力已经获得了各种双特异性和多特异性结合形式的证明和可用性。形式的多样性包括，例如，单链Fv抗体(scFv，Huston等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85:5879-5883(1988))、四价IgG-scFv融合体(Coloma和Morrison，Nat.Biotechnol.，15:159-163(1997))、双链抗体(diabody)(Holliger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448(1993))、串联scFv分子(参见，例如，Bargou等，Science321，974-977(2008))、四价IgG-样双可变结构域抗体(“DVD-Ig”，Wu等，Nat.Biotechnol.，25:1290-1297(2007))、四价Fab串联免疫球蛋白(“FIT-Ig”)，(WO 2015/103072，Epimab Biotheraupeutics)、二价大鼠/小鼠杂合双特异性IgG(Lindhofer等，J.Immunol.，155:219-225(1995))和双特异性crossmab结合蛋白(参见，例如，WO 2013/026831(Roche Glycart AG)；WO 2014/167022(Engmab AG))。对于可能用于治疗疾病特别感兴趣的是，设计和生产可以结合两个不同表位或抗原的各种工程化双特异性抗体，从而避免了对联合治疗的需要。参见，例如，Spiess等，Molec.Immunol.，67:95-106(2015)，Riethmüller，Cancer Immun.，12:12-18(2012)，Kontermann，Acta PharmacologicaSinica，26(1):1-9(2005)，Marvin等，Acta Pharmacologica Sinica，26(6):649-658(2005)中的综述。

越来越关注开发用于治疗各种癌症的双特异性抗体。特别感兴趣的是可以使用双特异性抗体以使T细胞重新靶向从而杀死各种肿瘤细胞。在这种“T细胞重新靶向”方法的实例中，可以设计双特异性抗体，使其结合靶癌细胞上的表面抗原，并且还结合未成熟T细胞上的T细胞受体(TCR)复合物的激活组分，如CD3。双特异性抗体与两种细胞类型的同时结合在靶细胞和T细胞之间提供暂时的关联(细胞与细胞的突触)，导致攻击靶向的癌细胞的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活。因此，T细胞被人工重新靶向特定的靶癌细胞，但与靶细胞递呈的肽抗原或T细胞的特异性无关，而这些是MHC限制性激活CTL通常所需的。在这种情况下，尤为重要的是，CTL仅在靶细胞向其递呈双特异性抗体时被激活，即，当免疫突触被模拟时，但在只有抗体与T细胞抗原结合时不被激活。