[发明专利]单价不对称串联Fab双特异性抗体

权利要求书

1.包含多肽链(a)、(b)、(c)和(d)的单价不对称串联Fab双特异性抗体(MAT-Fab抗体)，其中：

(a)是重多肽链(“重链”)，其中所述重链包含(从氨基端至羧基端)：VL_A-CL-VH_B-CH1-铰链-CH2-CH3m1，其中：

VL_A是直接与CL融合的人免疫球蛋白轻链可变结构域，CL是人轻链恒定结构域，其中VL_A-CL是识别第一抗原或表位的第一Fab结合单元的免疫球蛋白轻链组分并与VH_B直接融合，其中VH_B是与CH1直接融合的人免疫球蛋白重链可变结构域，CH1是人免疫球蛋白重链CH1恒定结构域，其中VH_B-CH1是识别第二抗原或表位的第二Fab结合单元的免疫球蛋白重链组分，并且其中VH_B-CH1与铰链-CH2直接融合，其中铰链-CH2是免疫球蛋白重链的铰链-CH2区，并且其中铰链-CH2与CH3m1直接融合，CH3m1是第一人免疫球蛋白重链CH3恒定结构域，其已经用一个或多个杵臼进入孔洞(KiH)突变进行了突变以在所述CH3m1恒定结构域中形成结构杵臼或结构孔洞；

(b)是包含VH_A-CH1的第一MAT-Fab轻链，其中VH_A是与CH1直接融合的人免疫球蛋白重链可变结构域，CH1是人免疫球蛋白重链CH1恒定结构域，并且其中VH_A-CH1是所述第一Fab结合单元的免疫球蛋白重链组分；

(c)是包含VL_B-CL的第二MAT-Fab轻链，其中VL_B是与CL直接融合的人免疫球蛋白轻链可变结构域，CL是人免疫球蛋白轻链CL结构域，并且其中VL_B-CL是所述第二Fab结合单元的免疫球蛋白轻链组分；和

(d)是包含铰链-CH2-CH3m2的Fc多肽链(Fc链)，其中铰链-CH2是免疫球蛋白重链的铰链-CH2区并且其中铰链-CH2与CH3m2直接融合，CH3m2是第二人免疫球蛋白重链CH3恒定结构域，其已经用一个或多个杵臼进入孔洞(KiH)突变进行了突变以在所述CH3m2恒定结构域中形成结构杵臼或结构孔洞；

条件是：

在重链的CH3m1结构域已经突变形成结构杵臼时，Fc链的CH3m2结构域已突变形成互补的结构孔洞，以促进CH3m1结构域与CH3m2结构域的配对；和

在重链的CH3m1结构域已经突变形成结构孔洞时，Fc链的CH3m2结构域已突变形成互补的结构杵臼，以促进CH3m1结构域与CH3m2结构域的配对；和

所述MAT-Fab抗体任选地在CH3m1结构域和CH3m2结构域中包含突变以引入半胱氨酸残基，以在CH3m1结构域与CH3m2结构域的配对中促进二硫键形成。

2.根据权利要求1的MAT-Fab抗体，其中，在CH3m1结构域或CH3m2结构域中形成结构杵臼的一个或多个KiH突变是苏氨酸残基变成酪氨酸残基或苏氨酸残基变成色氨酸残基。

3.根据权利要求2的MAT-Fab抗体，其中将苏氨酸残基变成酪氨酸残基的KiH突变将CH3结构域的位置21的苏氨酸变成酪氨酸。

4.根据权利要求2的MAT-Fab抗体，其中将苏氨酸残基变成色氨酸残基的KiH突变将CH3结构域的位置21的苏氨酸变成色氨酸。

5.根据权利要求2-4任一项的MAT-Fab抗体，其中形成结构杵臼的KiH突变是在重链的CH3m1结构域中。

6.根据权利要求1的MAT-Fab，其中，在CH3m1结构域或CH3m2结构域中形成结构孔洞的突变是酪氨酸残基变成苏氨酸残基、或是苏氨酸残基变成丝氨酸残基、亮氨酸残基变成丙氨酸残基和酪氨酸残基变成缬氨酸残基的组合。

7.根据权利要求6的MAT-Fab抗体，其中将酪氨酸残基变成苏氨酸残基的突变将CH3结构域的位置62的酪氨酸变成苏氨酸。