[发明专利]一种采用细胞培养基自脐带羊膜中分离间充质干细胞的方法

说明书

本发明涉及一种自脐带的羊膜中分离间充质干细胞群的方法，所述方法包括在培养基中培养脐带组织，所述培养基包含DMEM(杜尔贝科改良伊格尔培养基)、F12(哈姆F12培养基)、M171(培养基171)和FBS(胎牛血清)。本发明还涉及一种自脐带的羊膜中分离的间充质干细胞群，其中所述干细胞群的至少约90％或更多的细胞表达以下标记物中的每一个：CD73、CD90和CD105，且缺乏以下标记物的表达：CD34、CD45和HLA‑DR。本发明还涉及一种该间充质干细胞群的药物组合物。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求于2016年10月5日提交的美国临时申请No.62/404,582的优先权的权益，该申请的内容以引用的方式全文并入本文用于全部目的。

技术领域

本发明涉及一种自脐带的羊膜中分离间充质干细胞(或此类干细胞群)的方法，以及一种自脐带的羊膜中分离的间充质干细胞群。本发明还涉及一种用于自脐带的羊膜中分离间充质干细胞的细胞培养基。本发明还涉及该种分离的间充质干细胞群的药物组合物和用途。本发明还涉及治疗疾病或障碍的方法，该方法包括向有此需要的受试者施用本发明的间充质干细胞群或含有此类间充质干细胞群的药物组合物。

背景技术

在美国专利申请2006/0078993(得到授权的美国专利9,085,755和9,737,568)及对应的国际专利申请WO2006/019357中首次报道了自脐带的羊膜中分离的间充质干细胞。自此，脐带组织作为多能细胞源而备受关注；由于脐带的广泛可获得性，已将脐带，特别是自脐带的羊膜中分离的干细胞(也称为“脐带衬干细胞(cord lining stem cell)”)，看作是用于再生医学的细胞的极好替代来源。参见Jeschke等，Umbilical Cord LiningMembrane and Wharton’s Jelly-Derived Mesenchymal Stem Cells:the Similaritiesand Differences；The Open Tissue Engineering and Regenerative MedicineJournal,2011,4,21-27。

随后的一项研究比较了源自脐带的羊膜(脐带衬(CL-MSC)、脐带血(CB-MSC)、胎盘(P-MSC)和华通氏胶(WJ-MSC))的人间充质干细胞(MSC)的表型、增殖率、迁移、免疫原性和免疫调节能力(Stubbendorf等，Immunological Properties of Extraembryonic HumanMesenchymal Stromal Cells Derived from Gestational Tissue,STEM CELLS ANDDEVELOPMENT Volume 22,Number 19,2013,2619-2629)。Stubbendorf等的结论是，胚胎外妊娠组织来源的MSC群显示了不同的逃避免疫应答以及发挥免疫调节作用的潜力。作者还发现，由于CL-MSC显示低免疫原性，其显示出最具希望的用于细胞疗法的潜力，但是它们也表现出增强的增殖和迁移潜力，因此未来的研究应集中在可以在其中施用CL-MSC的最佳疾病模型上。

尽管采用如美国专利申请2006/0078993和国际专利申请WO2006/019357中描述的方案可以容易地获得羊膜的间充质干细胞，对于使用这些脐带衬MSC的临床试验来说，掌握这样一种方法将是有利的，该种方法允许分离这些脐带衬MSC的高度同源的群并因此该群能够用于临床试验。

因此，本发明的一个目的是提供一种自脐带的羊膜中分离满足该种需求的间充质干细胞群的方法。因此，本发明的还一目的是提供自脐带的羊膜中分离的高度同源的间充质干细胞群。

发明内容

本发明的目的通过具有独立权利要求中所述的特征的方法、间充质干细胞群、相应的药物组合物以及细胞培养基来实现。