[发明专利]一种采用细胞培养基自脐带羊膜中分离间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种自脐带的羊膜中分离间充质干细胞群的方法，所述方法包括在培养基中培养脐带组织，所述培养基包含DMEM(杜尔贝科改良伊格尔培养基)、F12(哈姆F12培养基)、M171(培养基171)和FBS(胎牛血清)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约55至65％(v/v)的DMEM，终浓度为约5至15％(v/v)的F12，终浓度为约15至30％(v/v)的M171和终浓度为约1至8％(v/v)的FBS。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约57.5至62.5％(v/v)的DMEM，终浓度为约7.5至12.5％(v/v)的F12，终浓度为约17.5至25.0％(v/v)的M171和终浓度为约1.75至3.5％(v/v)的FBS。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约61.8％(v/v)的DMEM，终浓度为约11.8％(v/v)的F12，终浓度为约23.6％(v/v)的M171和终浓度为约2.5％(v/v)的FBS。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述培养基进一步包含终浓度为约1ng/ml至约20ng/ml的表皮生长因子(EGF)。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约10ng/ml的EGF。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约1μg/ml至10μg/ml的胰岛素。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述培养基包含终浓度为约5μg/ml的胰岛素。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基进一步包含以下补充物中的至少一种：腺嘌呤、氢化可的松和3,3’,5-三碘-L-甲状腺原氨酸钠盐(T3)。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基包含腺嘌呤、氢化可的松和3,3’,5-三碘-L-甲状腺原氨酸钠盐(T3)中的全部三种。

11.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述培养基以约0.01至约0.1μg/ml腺嘌呤的终浓度包含腺嘌呤，以约0.1至约10μg/ml氢化可的松的终浓度包含氢化可的松，和/或以约0.5至约5ng/ml的终浓度包含3,3’,5-三碘-L-甲状腺原氨酸钠盐(T3)。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括培养所述脐带组织直至所述羊膜的间充质干细胞的细胞生长晕达到约70-80％融合。

13.根据权利要求12所述的方法，其包括自用于所述培养的培养容器中移除所述间充质干细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，其中通过酶处理进行自所述培养容器中移除所述间充质干细胞。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述酶处理包括胰蛋白酶消化。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述间充质干细胞转移至用于传代培养的培养容器中以传代培养。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述间充质细胞以1.0x10⁶个细胞/ml的浓度悬浮以传代培养。

18.根据权利要求17所述的方法，其中在权利要求1至10中任一项所限定的培养基中传代培养所述间充质干细胞。