[发明专利]用于免疫疗法的T细胞组合物

说明书

本发明涉及包含异质T细胞群体的组合物，所述T细胞群体对适用于过继性免疫疗法的选定抗原具有反应性；以及用于制备T细胞组合物的方法。

技术领域

本发明涉及包含异质T细胞群体的组合物，所述T细胞群体对适用于过继性免疫疗法的选定抗原具有反应性；以及用于制备T细胞组合物的方法。

背景技术

在人的免疫系统首次看到抗原后的几天时期内，产生识别所述抗原的T细胞群体，并且这些T细胞此后确定对所述抗原的应答的性质。T细胞的抗原识别和特异性由细胞表面上表达的T细胞受体(TCR)的结构特征赋予。单一T细胞具有能够结合至与特异性主要组织相容性复合物分子或MHC组合呈递的单一抗原的TCR。因此，T细胞的抗原特异性的特征在于由细胞表现出的特异性TCR的存在和功能。虽然涉及多种细胞亚型，但通常出现的T细胞的特征在于各种细胞表面标志物(CD4+：TH1、TH2、Treg、T滤泡辅助、TH17、TH22、TH9；CD8+：CTL等)并且正是由于这些不同细胞亚型的功能，产生细胞或体液免疫应答。此外，所述群体中某些T细胞亚群是免疫抑制性的(例如，Treg、TH17、无变应性(anergized)的T细胞)，并且它们的存在可诱导免疫耐受。

早在20世纪90年代，离体扩增的抗原特异性T细胞的过继转移显示出赋予针对CMV和EBV的免疫性。(Riddell等人Science 1992；257:238)(Rooney等人Blood 1998；92:1549–55)。然而，在肿瘤进展过程中，对肿瘤的免疫应答集中在少数“显性”抗原上，所述抗原在促进肿瘤消退方面无效。在使用离体扩增的T细胞用于免疫疗法的过去尝试中，肿瘤相关的显性抗原反应性T细胞被无意地扩增，从而导致结果的不一致性。

在Kawakami等人的研究中，大多数黑素瘤患者表现出针对人黑素细胞特异性抗原(MART-1/Melan A)的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性，但仅少数针对另一种肿瘤相关抗原gp100。当肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)用于过继疗法时，肿瘤消退与gp100反应性T细胞相关，而不是与MART-1反应性T细胞相关。(Kawakami Y.等人,J.Immunol.1995,154(8):3961-8)。在另一项研究中，用癌抗原免疫黑素瘤患者增加循环CD8+CTL的数量，但不与肿瘤消退相关。(Rosenberg等人,1998,Nature Medicine 4:321)。

这些不一致涉及以下事实：肿瘤微环境是复杂的并且主要通过下调T细胞的细胞毒性作用促进肿瘤存活。调控性T细胞(或Treg)介导的致耐受性应答发展，并且通常主要针对表现出高丰度、高亲合力的肿瘤浸润性T细胞，所述T细胞识别免疫显性肿瘤抗原。另外，抗原的丧失可能产生，从而提供肿瘤逃避免疫反应性的手段。因此，当从肿瘤(即TIL)中分离的T细胞针对高抗原识别和扩增进行离体选择且然后重新输注在患者体内时，所述细胞主要针对一种或多种显性肿瘤抗原，从而产生肿瘤负荷的仅暂时降低。即使当靶向多种抗原的T细胞群体用于治疗方案中时，肿瘤也可能变得对随后的施用难治(Rosenberg等人,J.Immunother.2003,26(5):385-393)。先前研究还指出，过继性T细胞疗法的益处通过先前淋巴消减来抵消遏制性淋巴细胞功能而增强。在早期病例中，用化学疗法预处理宿主增加了对随后免疫疗法的应答(Dudley M.E.等人,Science.2002,10月25日；298(5594):850-4；Dudley M.E.等人,J.Clin.Oncol.,2005,4月1日；23(10):2346-57)；(美国专利8,034,334)。

因此，仍然需要更好的过继性T细胞疗法。

发明内容

在一方面，本发明提供了一种用于制备可用于过继性细胞疗法的组合物的方法，所述过继性细胞疗法富含对一种或多种靶抗原具有反应性的T细胞。在一个实施方案中，本发明提供了一种用于制备包含T细胞的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)获得包含T细胞的初始细胞群体；