[发明专利]分泌治疗性蛋白的工程化细菌及其使用方法

说明书

提供了分泌治疗性多肽的工程化细菌、包含该细菌的药物组合物、产生重组多肽的方法以及将该细菌用于诊断和治疗目的的方法。

相关申请

本申请要求2016年8月31日提交的美国临时专利申请No.62/381,961的优先权，其全部内容通过引用明确并入本文。

技术领域

本文描述的技术涉及分泌治疗性多肽的工程化细菌、包含该工程化细菌的药物组合物、产生重组多肽的方法以及将该工程化细菌用于诊断和治疗目的的方法。

背景技术

使用工程化细菌生产重组多肽通过允许产生医学上重要的多肽(其否则难以从天然来源获得)而导致医学科学的显著进步。此类多肽在体外工程化细菌中过表达，分离和纯化用于治疗用途。另外，表达重组多肽的工程化细菌可用于在体内将重组多肽递送至受试者以诊断和治疗疾病和/或障碍。

然而，一些重组多肽在工程化细菌中的表达，特别是含二硫键的多肽，通常可能具有挑战性并导致低产率或错误折叠的蛋白质。二硫键形成是主要限制于通常位于细胞质外的蛋白质的过程，例如分泌到内质网(ER)腔中的真核蛋白质，或存在于革兰氏阴性细菌周质中的原核蛋白质。正确的蛋白质折叠通常依赖于二硫键的形成，并且不正确地折叠的蛋白质可能不具有功能活性。此外，能够分泌适当折叠的治疗或诊断多肽的工程化细菌还必须表达足够量以对体内诊断和治疗方法具有临床有效性。

因此，本领域需要以高产率产生正确折叠的重组多肽的方法。此外，本领域还需要产生工程化细菌的方法，所述工程细菌可以安全地施用于受试者并产生和分泌用于各种医学用途的治疗性多肽(例如，诊断剂和治疗剂)。

发明内容

在以下对实施方案的描述及其附图中以及从权利要求，本发明的某些实施方案的其他特征和优点将变得更加明显。

在一个方面，本文提供了包含异源核酸的工程化细菌，其中异源核酸包含编码信号识别颗粒(SRP)途径信号序列的核酸序列、编码CsgGE输出信号序列的核酸序列和编码治疗性多肽的核酸序列。

在一些实施方案中，CsgGE输出信号序列是大肠杆菌CsgGE输出信号序列。在一些实施方案中，CsgGE输出信号序列包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

在一些实施方案中，SRP途径信号序列包含选自CcmH信号序列、DsbA信号序列、FlgI信号序列、SfmC信号序列、FocC信号序列、NikA信号序列、TolB信号序列、TorT信号序列和YraI信号序列的信号序列。在一些实施方案中，SRP途径信号序列包含FlgI信号序列。在一些实施方案中，SRP途径信号序列包含SfmC信号序列。在一个实施方案中，SRP途径信号序列包含YraI信号序列。