[发明专利]分泌治疗性蛋白的工程化细菌及其使用方法

权利要求书

1.一种包含异源核酸的工程化细菌，其中所述异源核酸包含

编码信号识别颗粒(SRP)途径信号序列的核酸序列，

编码CsgGE输出信号序列的核酸序列，和

编码治疗性多肽的核酸序列。

2.如权利要求1所述的工程化细菌，其中所述CsgGE输出信号序列是大肠杆菌CsgGE输出信号序列。

3.如权利要求1-2中任一项所述的工程化细菌，其中所述CsgGE输出信号序列包含SEQID NO：1的氨基酸序列。

4.如权利要求1-3中任一项所述的工程化细菌，其中所述SRP途径信号序列包含选自下组的信号序列：CcmH信号序列、DsbA信号序列、FlgI信号序列、SfmC信号序列、FocC信号序列、NikA信号序列、TolB信号序列、TorT信号序列和YraI信号序列。

5.如权利要求4所述的工程化细菌，其中所述SRP途径信号序列包含FlgI信号序列。

6.如权利要求4所述的工程化细菌，其中所述SRP途径信号序列包含SfmC信号序列。

7.如权利要求4所述的工程化细菌，其中所述SRP途径信号序列包含YraI信号序列。

8.如权利要求1-7中任一项所述的工程化细菌，其中所述治疗性多肽选自抗体、抗体片段、酶、融合蛋白、激素、抗原、血栓溶解剂、细胞因子、免疫毒素和生长因子。

9.如权利要求8所述的工程化细菌，其中所述抗体片段是单结构域抗体。

10.如权利要求9所述的工程化细菌，其中所述单结构域抗体源自选自美洲驼、羊驼、骆驼和鲨鱼的动物。

11.如权利要求9或权利要求10所述的工程化细菌，其中所述单结构域抗体对于选自下组的抗原是特异性的：癌胚抗原(CEA)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、绿色荧光蛋白(GFP)、β-内酰胺酶、艰难梭菌毒素A、艰难梭菌毒素B、肉毒杆菌毒素(BoTox)、霍乱毒素(CTX)、诺罗病毒衣壳蛋白、轮状病毒衣壳蛋白和疟原虫膜蛋白。

12.如权利要求1-11中任一项所述的工程化细菌，其中所述治疗性多肽是非淀粉样蛋白多肽。

13.如权利要求1-12中任一项所述的工程化细菌，其中所述编码SRP途径信号序列的核酸序列和所述编码CsgGE输出信号序列的核酸序列位于所述编码治疗性多肽的核酸序列的N-末端。

14.如权利要求1-13中任一项所述的工程化细菌，其中所述异源核酸还包含编码多肽标签的核酸序列。

15.如权利要求14所述的工程化细菌，其中所述多肽标签选自聚组氨酸标签、myc标签、FLAG标签、血球凝集素(HA)标签和V5标签。

16.如权利要求1-15中任一项所述的工程化细菌，其中所述工程化细菌是非致病性细菌。

17.如权利要求1-16中任一项所述的工程化细菌，其中所述工程化细菌是拟杆菌属(Bacteroides)或埃希氏菌属(Escherichia)的细菌。

18.如权利要求1-17中任一项所述的工程化细菌，其中所述工程化细菌是益生菌。

19.如权利要求1-18中任一项所述的工程化细菌，其中所述工程化细菌是大肠杆菌种。