[发明专利]产生经修饰的自然杀伤细胞的方法及使用方法

说明书

本文中公开了产生包括一或多种异源核酸的NK细胞的方法。所述方法包括在一或多种细胞因子的存在下培养分离的NK细胞群体以产生经活化的NK细胞群体。所述经活化的NK细胞群体用包含所述一或多种异源核酸的病毒载体转导，例如通过使所述经活化的NK细胞与包括所述病毒载体的病毒粒子接触。然后在一种或多种细胞因子的存在下，且任选地在受辐射的饲养细胞的存在下培养所得的经转导的NK细胞，以产生扩增的经转导的NK细胞群体。还公开了通过向患病(诸如肿瘤或过度增生性病症)的对象施用由本文所述的方法产生的NK细胞来治疗所述对象的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年7月25日提交的美国临时申请No.62/366,493的权益，其全文以引用的方式并入本文中。

发明领域

本发明涉及产生经修饰的自然杀伤细胞的方法、包含所述经修饰的自然杀伤细胞的组合物及其使用方法。

背景技术

除抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞以外，先天免疫系统的细胞组分可有助于对恶性细胞生长的免疫监督。具体来说，自然杀伤(NK)细胞可消除异常细胞，而不致敏(priming)或敏化。通过平衡来自抑制性和活化的NK细胞受体的信号来确定其活性。抑制性受体，诸如杀伤免疫球蛋白受体(KIR)与自身的主要组织相容性复合体(MHC)I类抗原相互作用并且保护正常细胞免受NK细胞攻击。

二十多年以来，已研究致力于利用NK细胞的抗肿瘤活性来进行对人类癌症的免疫疗法。然而，许多恶性细胞表达MHC I类抗原且因此自然地对自体同源NK细胞的溶解产生抗性。因此，使用过继转移自体同源NK细胞的首次临床试验并未产生显著的治疗效果。调节NK细胞的细胞因子、趋化因子和活化/抑制性受体表达是一种具有吸引力的用于增强NK细胞抗肿瘤活性的策略。然而，难以实现对原代NK细胞的有效遗传修饰。

发明内容

需要简单且有效的基因转移方法来有效地传递和表达原代NK细胞中感兴趣的基因。本文中公开有效的基于病毒载体的方法用于基因转移至NK细胞中，所述方法展现出对转基因的稳定且稳健的长期表达。

本文中公开产生包括或表达一种或多种异源核酸的NK细胞(本文在一些实施例中称为“经修饰的”NK细胞)的方法。所述方法包括在一种或多种细胞因子(例如，白细胞介素(IL)-2、IL-15和/或IL-21)的存在下培养分离的NK细胞(诸如从对象分离或纯化的NK细胞)群体以产生活化的NK细胞群体。所述活化的NK细胞群体由包括所述一种或多种异源核酸的病毒载体转导，例如通过使所述活化NK细胞与包括所述病毒载体的病毒粒子接触。然后在一种或多种细胞因子(例如，IL-2)的存在下，且任选地在饲养细胞的存在下培养得到的转导NK细胞以产生经过扩增的经转导的NK细胞群体。

本文中还公开用所述经修饰的NK细胞治疗患病(诸如肿瘤或过度增生性病症或病毒性感染)对象的方法。在一些实施方案中，所述方法包括获得从对象或供体分离的NK细胞群体，并且在一种或多种细胞因子(例如，IL-2、IL-15和/或IL-21)的存在下培养所述分离的NK细胞群体以产生活化的NK细胞群体。所述活化的NK细胞群体由适于治疗对象病症的包括一种或多种异源核酸的病毒载体转导，例如通过使活化的NK细胞与包括病毒载体的病毒粒子接触。然后在一种或多种细胞因子(例如，IL-2)的存在下，且任选地在饲养细胞的存在下培养得到的经转导的NK细胞以产生经过扩增的经转导的NK细胞群体，将其施用于对象(例如，在包括药学上可接受的载体的组合物中)。

本文中还公开包括一种或多种异源核酸的经修饰的NK细胞(诸如经修饰的NK细胞群体)，诸如由包括一种或多种感兴趣的核酸的病毒载体(诸如，慢病毒载体)转导的NK细胞。在一些实施例中，异源核酸编码CXCR4、CCR7、CXCR3或CD16(例如，高亲和性CD16或CD16-V158)。其它刚兴趣的核酸显示在下文表1中。还公开包括经修饰的NK细胞(诸如经修饰的NK细胞群体)和药学上可接受的载体的组合物。在一些实施方案中，通过本文中公开的方法产生经修饰的NK细胞。