[发明专利]产生经修饰的自然杀伤细胞的方法及使用方法

权利要求书

1.一种产生包含一种或多种异源核酸的自然杀伤(NK)细胞的方法，其包括：

在一或多种细胞因子的存在下培养分离的NK细胞群体以产生活化的NK细胞群体；

用包含一或多种异源核酸的病毒载体转导所述活化的NK细胞群体以产生经转导的NK细胞群体；以及

在一或多种细胞因子和/或受辐射的饲养细胞的存在下培养所述经转导的NK细胞群体以产生扩增的经转导的NK细胞群体。

2.一种治疗患有肿瘤、过度增生性疾病或病毒性感染的对象的方法，其包括：

自所述对象或供体获得分离的自然杀伤(NK)细胞群体；

在一或多种细胞因子的存在下培养所述分离的NK细胞群体以产生活化的NK细胞群体；

用包含一或多种异源核酸的病毒载体转导所述经活化的NK细胞群体以产生经转导的NK细胞群体；

在一或多种细胞因子和/或受辐射的饲养细胞的存在下培养所述转导的NK细胞群体以产生扩增的经转导的NK细胞群体；以及

向所述对象施用包含所述扩增的经转导的NK细胞群体的组合物。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述在一或多种细胞因子的存在下培养所述分离的NK细胞群体包括在含有白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-15(IL-15)和白细胞介素-21(IL-21)中的一种或多种的细胞培养基中培养所述分离的NK细胞群体。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述细胞培养基含有500IU/ml IL-2、10ng/ml IL-15以及20ng/ml IL-21中的一种或多种。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述在一种或多种细胞因子的存在下培养所述分离的NK细胞群体包括在受辐射的饲养细胞的存在下培养所述分离的NK细胞群体。

6.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述在一或多种细胞因子的存在下培养所述分离的NK细胞群体不包括在受辐射的饲养细胞的存在下培养所述分离的NK细胞群体。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述在一或多种细胞因子的存在下培养所述分离的NK细胞群体包括将所述分离的NK细胞群体在含有一或多种细胞因子的细胞培养基中培养1至14天。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述包含一或多种异源核酸的病毒载体转导所述经活化的NK细胞群体包括使所述NK细胞群体与包含所述病毒载体的病毒粒子接触。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述包含一或多种异源核酸的病毒载体为慢病毒载体。

10.如权利要求8或权利要求9所述的方法，其中使所述经活化的NK细胞群体与包含所述病毒载体的病毒粒子接触1至3天。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述在一或多种细胞因子和/或受辐射的饲养细胞的存在下培养所述经转导的NK细胞群体包括在包含IL-2的培养基中培养所述经转导的NK细胞群体。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述培养基包含500IU/ml IL-2。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述在一或多种细胞因子和/或受辐射的饲养细胞的存在下培养所述经转导的NK细胞群体包括在受辐射的饲养细胞的存在下培养所述经转导的NK细胞群体。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述受辐射的饲养细胞与所述转导的NK细胞的比率为10:1。

15.如权利要求13或权利要求14所述的方法，所述受辐射的饲养细胞包含经埃-巴二氏病毒转化的类淋巴母细胞细胞系或K562细胞。