[发明专利]RNA检测试剂盒和方法

权利要求书

1.用于检测RNA分子的试剂盒，其包含：

短逆转录引物，其由第一杂交寡核苷酸和第一衔接子寡核苷酸构成，所述第一杂交寡核苷酸由与所述RNA分子的poly(A)尾杂交的寡(dT)构成，并且所述第一衔接子寡核苷酸连接至所述第一杂交寡核苷酸的5’末端并且为不与所述RNA分子杂交的任何核酸序列；

延伸引物，其比所述逆转录引物更长并且由第二杂交寡核苷酸和第二衔接子寡核苷酸构成，所述第二杂交寡核苷酸能够与从所述RNA分子逆转录的单链cDNA的3’末端部分特异性杂交，该3’末端部分为所述单链cDNA的除寡(dT)以外的部分，并且所述第二衔接子寡核苷酸连接至所述第二杂交寡核苷酸的5’末端并且具有不与所述单链cDNA杂交的任何核酸序列；以及

正向引物，其具有在所述第二衔接子寡核苷酸序列内的序列。

2.权利要求1所述的试剂盒，其中所述RNA分子是长度为18至180nt的小RNA分子。

3.权利要求2所述的试剂盒，其中所述小RNA分子是tRNA、snRNA、siRNA、exRNA、piRNA、scaRNA或miRNA。

4.权利要求1所述的试剂盒，其中所述第二衔接子寡核苷酸包含取决于待扩增的RNA分子种类的RNA标记寡核苷酸，或者所述RNA标记寡核苷酸和独立于待扩增的RNA分子种类的具有共有核酸序列的共有寡核苷酸。

5.权利要求1所述的试剂盒，其中所述短逆转录引物的长度为29至34nt。

6.权利要求1所述的试剂盒，其中所述第一衔接子寡核苷酸的长度为17至22nt。

7.用于检测RNA分子的试剂盒，其包含：

用于逆转录的短反向引物，其由第一杂交寡核苷酸和第一衔接子寡核苷酸构成，所述第一杂交寡核苷酸由与在所述RNA分子3’末端的5至9nt的所述RNA分子的3’末端部分杂交的核酸序列构成，并且所述第一衔接子寡核苷酸连接至所述第一杂交寡核苷酸的5’末端并且为不与所述RNA分子杂交的任何核酸序列；

延伸引物，其比用于逆转录的反向引物更长并且由第二杂交寡核苷酸和第二衔接子寡核苷酸构成，所述第二杂交寡核苷酸能够与从所述RNA分子逆转录的单链cDNA的部分特异性杂交，该部分为所述单链cDNA的除对应于所述RNA分子的3’末端部分的部分以外的部分，并且所述第二衔接子寡核苷酸连接至所述第二杂交寡核苷酸的5’末端并且具有不与所述单链cDNA杂交的任何核酸序列；以及

正向引物，其具有在所述第二衔接子寡核苷酸序列内的序列。

8.权利要求7所述的试剂盒，其中所述RNA分子是长度为18至180nt的小RNA分子。

9.权利要求8所述的试剂盒，其中所述小RNA分子是tRNA、snRNA、siRNA、exRNA、piRNA、scaRNA或miRNA。

10.权利要求7所述的试剂盒，其中所述第二衔接子寡核苷酸包含取决于待扩增的RNA分子种类的RNA标记寡核苷酸，或者所述RNA标记寡核苷酸和独立于待扩增的RNA分子种类的具有共有核酸序列的共有寡核苷酸。

11.权利要求7所述的试剂盒，其中所述用于逆转录的短反向引物的长度为26至28nt，23至28nt，或18至28nt。

12.权利要求7所述的试剂盒，其中所述第一衔接子寡核苷酸的长度为20至22nt，17至22nt，或12至22nt。