[发明专利]双特异性蛋白质及其制备方法

权利要求书

1.用于靶向两种不同靶标的双特异性蛋白质，所述双特异性蛋白质包括第一CH3结构域或含所述第一CH3结构域的第一Fc区以及第二CH3结构域或含所述第二CH3结构域的第二Fc区，其中，突变所述第一CH3结构域和第二CH3结构域，使得通过以下至少一种突变来修饰选自在所述第一CH3结构域和第二CH3结构域之间形成各自的氨基酸-氨基酸键的氨基酸对中的至少一对：

(1)在所述CH3结构域之间的至少一个氨基酸对中的两个氨基酸相互交换的突变(交换突变)；

(2)在所述CH3结构域之间的至少一个氨基酸对中的一个氨基酸被带正电荷的氨基酸取代，而另一个氨基酸被带负电荷的氨基酸取代的突变，其中所述氨基酸对中的两个氨基酸残基中的至少一个是不疏水的(引入静电相互作用的突变)；和

(3)在所述CH3结构域之间的至少一个氨基酸对中的一个氨基酸被大疏水性氨基酸取代，而另一个氨基酸被小疏水性氨基酸取代的突变(大小突变)，其中所述大氨基酸选自由色氨酸和苯丙氨酸组成的组，而所述小氨基酸选自由丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸组成的组。

2.权利要求1所述的双特异性蛋白质，其中，所述第一CH3结构域和第二CH3结构域各自独立地源于选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgE和IgM组成的组的免疫球蛋白。

3.权利要求1所述的双特异性蛋白质，其中，形成氨基酸-氨基酸键的所述氨基酸对是选自根据IgG1来源的CH3结构域中的Eu编号在下表所列出的氨基酸编号1至40中的至少一对或者选自由IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgE和IgM的CH3结构域中相应位置处的氨基酸对组成的组中的至少一对：

4.权利要求1所述的双特异性蛋白质，其中，所述引入静电相互作用的突变是所述两个氨基酸具有如下构成的突变：至少一个氨基酸对选自由IgG1 CH3结构域中的第364位丝氨酸和368位亮氨酸、第394位苏氨酸和第394位苏氨酸、357位谷氨酸和第370位赖氨酸、第357位谷氨酸和第349位酪氨酸、第366位苏氨酸和第407位酪氨酸，以及第394位苏氨酸和第397位缬氨酸组成的组(EU编号)；或者在IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgE和IgM的CH3结构域中相应位置处的氨基酸对，

一个被带正电荷的氨基酸取代，而另一个被带负电荷的氨基酸取代。

5.权利要求4所述的双特异性蛋白质，其中，所述带负电荷的氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸，且所述带正电荷的氨基酸是赖氨酸或精氨酸。

6.权利要求4所述的双特异性蛋白质，其中，所述引入静电相互作用的突变包括基于IgG1(EU编号)的以下突变的至少一种，或IgG2、IgG3、IgG、IgA1、IgA2、IgE和IgM的CH3结构域中相应突变的至少一种：

用带正电荷的氨基酸取代第364位丝氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第368位亮氨酸；

用带正电荷的氨基酸取代第394位苏氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第394位苏氨酸；

用带正电荷的氨基酸取代第357位谷氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第370位赖氨酸；

用带正电荷的氨基酸取代第357位谷氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第349位酪氨酸；

用带正电荷的氨基酸取代第366位苏氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第407位酪氨酸；

用带正电荷的氨基酸取代第394位苏氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第397位缬氨酸；和

用带正电荷的氨基酸取代第349位酪氨酸并用带负电荷的氨基酸取代第357位谷氨酸。

7.权利要求6所述的双特异性蛋白质，其中，所述带负电荷的氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸，且所述带正电荷的氨基酸是赖氨酸或精氨酸。