[发明专利]突变的免疫球蛋白结合多肽

说明书

具有改进的碱稳定性的Fc‑结合多肽，包含葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，所述突变体由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义，其中至少在对应于SEQ ID NO:4‑7的位置11的位置的天冬酰胺或丝氨酸残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。

技术领域

本发明涉及亲和色谱的领域，且更特别地涉及蛋白A的突变的免疫球蛋白-结合结构域，其可用于免疫球蛋白的亲和色谱。本发明还涉及所述突变的结构域的多聚体和涉及含有突变的结构域或多聚体的分离基质。

发明背景

免疫球蛋白代表全世界生产或开发的最普遍的生物制药产品。对于这种特定治疗市场的高商业需求以及由此的价值已导致重点放在制药公司上，以使它们各自的mAb生产过程的生产力最大化，同时控制相关的成本。

亲和色谱在大多数情况下作为这些免疫球蛋白分子，例如单克隆或多克隆抗体的纯化中的关键步骤之一而使用。一类特别感兴趣的亲和试剂是能够特异性结合免疫球蛋白分子的不变部分的蛋白，这样的相互作用是独立于抗体的抗原-结合特异性的。这样的试剂可广泛用来从不同的样品(例如但不限于血清或血浆制备物或细胞培养物来源的原料)亲和色谱回收免疫球蛋白。这样的蛋白的例子是葡萄球菌蛋白A，其含有能够结合来自不同物种的IgG免疫球蛋白的Fc和Fab部分的结构域。这些结构域通常被称为E-、D-、A-、B-和C-结构域。

基于葡萄球菌蛋白A (SpA)的试剂由于它们的高亲和性和选择性，已发现广泛用于生物技术领域，例如用于抗体的捕获和纯化的亲和色谱以及用于检测或定量。目前，基于SpA的亲和介质很可能是最广泛使用的从不同的样品(包括工业细胞培养上清液)分离单克隆抗体及其片段的亲和介质。因此，包含蛋白A-配体的各种基质是可市售获得的，例如，以天然蛋白A的形式(例如Protein A SEPHAROSE™, GE Healthcare, Uppsala, Sweden)，并且还包含重组蛋白A (例如rProtein-A SEPHAROSE™, GE Healthcare)。更特别地，在商业重组蛋白A产品中进行的基因操纵旨在促进其附接于载体和提高配体的生产力。

这些应用，像其它亲和色谱应用，需要综合考虑污染物的确切去除。这样的污染物可以例如是在色谱程序中吸附在固定相或基质上的未洗脱的分子，例如非-希望的生物分子或微生物，包括例如蛋白质、碳水化合物、脂质、细菌和病毒。从基质除去这样的污染物通常在第一次洗脱所需产物后进行，以在随后使用之前使基质再生。这样的除去通常涉及称为原位清洁(CIP)的程序，其中能够从固定相洗脱污染物的试剂被使用。经常使用的一类这样的试剂是通过所述固定相的碱性溶液。目前最广泛使用的清洁和消毒剂是NaOH，且其浓度可在从0.1至最多例如1 M的范围内，这取决于污染的程度和性质。这个策略与基质暴露于具有13以上的pH-值的溶液有关。对于许多含有蛋白质亲和配体的亲和色谱基质，这样的碱性环境是非常苛刻的条件且由于配体对所涉及的高pH的不稳定性，因此导致能力下降。