具有改进的碱稳定性的Fc‑结合多肽，包含葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，所述突变体由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义，其中至少在对应于SEQ ID NO:4‑7的位置11的位置的天冬酰胺或丝氨酸残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。
本发明涉及分离免疫球蛋白的方法，包括以下步骤：a)提供分离基质，其包含与多孔载体共价偶联的免疫球蛋白结合的碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，b)使包含免疫球蛋白的液体样品与分离基质接触，c)用洗涤液洗涤所述分离基质，d)用洗脱液从分离基质洗脱免疫球蛋白，和e)用清洁液清洁分离基质，其中碱稳定的蛋白A结构域包含由SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义的葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，其中SEQ ID NO 51或52的位置13和44处的氨基酸残基是天冬酰胺，和其中至少SEQ ID NO 51或52的位置3处的天冬酰胺残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。
本发明涉及储存分离基质的方法，所述分离基质包含与多孔载体共价偶联的免疫球蛋白结合的碱稳定的蛋白A结构域的多聚体。所述方法包含以下步骤：a)提供包含至少50%体积的水性碱金属氢氧化物溶液的储存液；b)用储存液渗透分离基质；和c)储存经储存液‑渗透的分离基质持续至少5天的储存时间。所述碱稳定的蛋白A结构域包含葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，所述突变体由SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义，或与其具有至少80%例如至少90%、95%或98%同一性，其中SEQ ID NO 51或52的位置13和44处的氨基酸残基是天冬酰胺，和其中至少SEQ ID NO 51或52的位置3处的天冬酰胺残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。
本发明涉及清洁和/或消毒分离基质的方法，所述分离基质包含与多孔载体共价偶联的免疫球蛋白结合的碱稳定的蛋白A结构域的多聚体。所述方法包含以下步骤：a)任选地使用分离基质纯化包含第一免疫球蛋白的混合物；b)提供包含至少50%体积的水性碱金属氢氧化物溶液的清洁液；和c)通过使清洁液与分离基质接触预定的接触时间来清洁和/或消毒分离基质。所述碱稳定的蛋白A结构域包含由SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义的葡萄球菌蛋白A(SpA)的亲本Fc‑结合结构域的突变体，其中SEQ ID NO 51或52的位置13和44处的氨基酸残基是天冬酰胺，和其中至少SEQ ID NO 51或52的位置3处的天冬酰胺残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。
