[发明专利]用于在微生物中产生蛋白质的工程化核糖体启动子

权利要求书

1.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含与编码目的蛋白质(POI)的核酸有效地连接的工程化杂合启动子，其中所述杂合启动子包含SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94、SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97中任一个的核苷酸序列，保留启动子活性的SEQ IDNO:65-80和90-97的子序列，与SEQ ID NO:65-80和90-97中任一个至少60％同源的核酸，或在中严格条件下与SEQ ID NO:65-80和90-97中任一个或其保留启动子活性的子序列杂交的核酸。

2.如权利要求1所述的分离的核酸，其中所述POI是酶。

3.如权利要求2所述的分离的核酸，其中所述酶选自由以下组成的组：乙酰酯酶、芳基酯酶、氨肽酶、淀粉酶、阿拉伯聚糖酶(arabinase)、阿拉伯呋喃糖苷酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、凝乳酶、角质酶、脱氧核糖核酸酶、差向异构酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡聚糖酶、葡聚糖裂解酶、内切-β-葡聚糖酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、半纤维素酶、己糖氧化酶、水解酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、裂解酶、甘露糖苷酶、氧化酶、氧化还原酶、果胶酸裂合酶、果胶乙酰酯酶、果胶解聚酶、果胶甲酯酶、果胶分解酶、过水解酶、多元醇氧化酶、过氧化物酶、酚氧化酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、鼠李糖-半乳糖醛酸酶、核糖核酸酶、奇异果甜蛋白、转移酶、转运蛋白、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶和己糖氧化酶。

4.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含与编码目的蛋白质的核酸有效地连接的工程化完整启动子，所述分离的核酸包含选自以下的式：

(I)5′-UP-第1Pro-ORF-3′；

(II)5′-UP-第1Pro-UTR-ORF-3′；

(III)5′-UP-第1Pro-第2Pro-ORF-3′；

(IV)5′-UP-第1Pro-第2Pro-UTR-ORF-3′；

(V)5′-UP-第1Pro-UTR-第2Pro-UTR-ORF-3′；

(VI)5′-UP-第1Pro-第2Pro-第3Pro-ORF-3′；

(VII)5′-UP-第1Pro-第2Pro-第3Pro-UTR-ORF-3′；以及

(VIII)5′-UP-第1Pro-第2Pro-UTR-第3Pro-UTR-ORF-3′，

其中UP是包含启动子上游元件的核酸，第1Pro、第2Pro和第3Pro是与至少包含-35/-10核心启动子序列相同或不同的核酸，UTR是包含非翻译区的核酸，并且ORF是编码目的蛋白质的核酸可读框，其中所述UP元件包含SEQ ID NO:45-61中的任一个、保留启动子活性的SEQ ID NO:45-61的子序列、与保留启动子活性的SEQ ID NO:45-61中的任一个至少60％同源的核酸、或在中严格条件下与SEQ ID NO:45-61中任一个或其保留启动子活性的子序列杂交的核酸，并且其中所述第1Pro、第2Pro和第3Pro包含SEQ ID NO:1-39和101-154中任一个、保留启动子活性的SEQ ID NO:1-39和101-154的子序列、与保留启动子活性的SEQ IDNO:1-39和101-154中任一个至少60％同源的核酸、或在中严格条件下与SEQ ID NO:1-39和101-154中任一个或其保留启动子活性的子序列杂交的核酸。

5.如权利要求4所述的分离的核酸，其中由ORF编码的POI是酶。

6.一种载体，所述载体包含如权利要求1所述的核酸。