[发明专利]用纳米孔的聚合物分析中的混合光学信号

权利要求书

1.一种分析聚合物的方法，包括：

将聚合物易位穿过纳米孔，其中所述聚合物的不同种类的单体被标记有产生可区分的光学信号的不同光学标记物，并且其中所述纳米孔限制所述单体将单个文件移动穿过包括多种单体的激发区；

当所述单体穿过所述激发区时，检测来自所述单体的光学信号的时间排序组；

将来自不同种类的单体的光学信号分开，以形成光学信号的单体特异性时间排序组；以及

由来自所述聚合物的光学信号的所述单体特异性时间排序组确定单体的序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物是通过在标记的核苷三磷酸的存在下延伸退火至模板核酸分子的引物而标记的多核苷酸。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述引物包含具有标记的核苷酸的关键序列，当所述多核苷酸易位所述纳米孔并穿过所述激发区时，所述标记的核苷酸产生初始光学信号。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述标记的核苷三磷酸包含至少两种附接至至少两种不同种类的核苷三磷酸的可区分的荧光标记物，使得所述延伸的引物中的至少两种不同种类的核苷酸可以通过由所述可区分的荧光标记物产生的荧光信号来识别。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物是多核苷酸，并且其中所述确定的步骤包括从由所述光学信号确定的核苷酸的重叠片段形成候选序列。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述纳米孔是蛋白质纳米孔。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述检测的步骤还包括在所述激发区中激发所述光学标记物，以产生所述光学信号。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述光学标记物是荧光标记物，并且其中所述激发区具有由所述纳米孔、相邻荧光标记物的相互猝灭和/或猝灭剂确定的体积和几何形状。

9.一种分析多核苷酸的方法，包括：

将多核苷酸易位穿过纳米孔，所述多核苷酸的核苷酸被标记有荧光标记物，并且所述纳米孔具有钻孔，所述钻孔在空间上限制所述荧光标记物以防止在其易位期间荧光信号的发射；

激发所述荧光标记物；

当所述多核苷酸易位穿过所述钻孔时，检测来自所述荧光标记物的荧光信号的时间序列；以及

从所述荧光信号的时间序列中确定被附接至所述多核苷酸的核苷酸的荧光标记物的序列。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述多核苷酸的不同种类的核苷酸上的所述荧光标记物发射有区别的荧光信号。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述荧光信号的时间序列中的每个值包括来自多种所述荧光标记物的荧光信号。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述检测的步骤包括将所述有区别的荧光信号分开，以形成荧光信号的多个测量的标记物特异性时间序列。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述确定的步骤包括将荧光信号的所述多个标记物特异性时间序列与核苷酸序列比较，并选择核苷酸序列，所述核苷酸序列将产生最接近荧光信号的所述测量的标记物特异性时间序列的荧光信号的时间序列。

14.如权利要求9所述的方法，其中所述确定的步骤包括从由所述荧光信号确定的核苷酸的重叠片段形成候选序列。