[发明专利]植物甜蛋白的细胞外分泌方法

权利要求书

1.一种具有提高的产量的植物甜蛋白的细胞外分泌的方法，包括：

(a)将核苷酸序列与表达载体连接以获得DNA构建体，所述核苷酸序列编码与植物甜蛋白偶联的信号前导序列，并通过转化将所述构建体导入BL21(DE3)大肠杆菌细胞；

(b)在葡萄糖的存在下，在培养基中培养步骤(a)携带重组构建体的转化细胞，并用选自IPTG或乳糖的试剂诱导蛋白质表达，经过范围从2小时至72小时的时间段，以在所述培养基中获得植物甜蛋白的分泌物，和

(c)诱导2-72小时后将培养基与细胞分离，并从澄清的培养基纯化植物甜蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物甜蛋白选自由野生型III型植物甜蛋白和III型植物甜蛋白的变体或多变体所组成的组。

3.根据权利要求1所述的方法，其中重组表达载体选自pET载体或具有IPTG诱导型启动子的表达载体。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述信号前导序列选自由pelB、ompA、Bla、PhoA、PhoS、MalE、LivK、LivJ、MglB、AraF、AmpC、RbsB、MerP、CpdB、Lpp、LamB、OmpC、PhoE、OmpF、TolC、BtuB和LutA信号序列所组成的组。

5.根据权利要求1所述的方法，其中将诱导剂以范围从约0.25mM至5mM的浓度加入所述培养基中。

6.根据权利要求1所述的方法，其中细胞的培养在25℃至37℃之间的温度下进行。

7.根据权利要求1所述的方法，其中植物甜蛋白的产量范围为约0.5g/l至约5g/l。

8.根据权利要求1所述的方法，其中表达宿主选自由BL21(DE3)细胞系和亲本大肠杆菌BL21细胞系的衍生物所组成的组。

9.根据权利要求1所述的方法，其中诱导剂选自由乳糖和乳糖类似物所组成的组。

10.根据权利要求1所述的方法，其中葡萄糖是在诱导前生长培养基的组分。