[发明专利]用来在过继性免疫疗法中进行免疫细胞调节的组合物和方法

权利要求书

1.经调节的免疫细胞群和至少两种药剂在制备药物中的用途，其包括：

所述免疫细胞与足够量的包含所述至少两种药剂的组合物接触足以获得经调节的免疫细胞群的时间；

其中所述经调节的免疫细胞群包含NK细胞；和

其中所述至少两种药剂包含GSK3抑制剂和(i)IL-15、(ii)MEK抑制剂和mTOR抑制剂、或(iii)STING激动剂。

2.根据权利要求1所述的用途，其中

(a)与未接触所述至少两种药剂的免疫细胞相比，所述经调节的免疫细胞包含的细胞具有

(i)改进的增殖、细胞毒性、细胞因子响应和/或细胞因子释放；

(ii)改进的细胞扩增；和/或

(iii)增加的CD57+细胞的数量或比例；

(b)在接触所述至少两种药剂之前，所述免疫细胞具有以下特性中的至少一种：

(i)包含：

(1)CD57-NK细胞；或

(2)CD57-NKG2C+NK细胞；

(ii)分离自或者包含在外周血液、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位组织、腹水、胸腔积液、脾组织、或肿瘤中；

(iii)分离自：

(1)健康受检者；

(2)患有自体免疫疾病、造血系统恶性肿瘤、病毒感染或实体瘤的受检者；

(3)以前被施用过基因修饰的免疫细胞的受检者；或者

(4)CMV血清阳性受检者；

(iv)被基因组工程化并包含插入、缺失、或核酸置换；

(v)包含至少一种基因修饰形态；

(vi)从干细胞或者祖细胞体外分化；或者

(vii)从造血或非造血系的非多能细胞体外转分化；

(c)包含所述至少两种药剂的所述组合物进一步包含一种或多种添加剂；和/或

(d)所述经调节的免疫细胞的制备包括：

(i)在接触足够量的用于调节的所述组合物的步骤之前，激活所述免疫细胞；以及任选地，在所述激活步骤之前，

(ii)使CD3和CD19细胞从用于激活和调节的所述免疫细胞中耗竭。

3.根据权利要求2所述的用途，其具有以下特性中的至少一种：

(a)其中所述干细胞包含诱导性多能干细胞(iPSC)、胚胎干细胞(ESCs)或造血干细胞；

(b)其中所述祖细胞是CD34+血原性内皮细胞、多潜能祖细胞、或NK祖细胞；

(c)其中所述干细胞或者祖细胞

(i)被基因组工程化并包含插入、缺失、或核酸置换，或者

(ii)包含至少一种基因修饰形态；

(d)其中所述免疫细胞的所述基因修饰形态包含以下中的至少一种：安全开关蛋白、靶向形态、受体、信号传导分子、转录因子、药学活性的蛋白和肽、药物目标候选物；或者促进所述免疫细胞的植入、运输、归巢、活力、自我更新、持久性、免疫响应调控和调节、和/或存活的蛋白质；

(e)其中所述免疫细胞的至少一种基因修饰形态包含以下中的一种或多种：

(i)B2M、TAP1、TAP2、TAP相关蛋白、NLRC5、PD1、LAG3、TIM3、RFXANK、CIITA、RFX5、或RFXAP、以及染色体6p21区中的任何基因的缺失或表达减少；以及

(ii)与双特异性或多特异性接合体或者通用接合体偶联的HLA-E、HLA-G、HACD16、hnCD16、41BBL、CD3、CD4、CD8、CD47、CD113、CD131、CD137、CD80、PDL1、A2AR、Fc受体、或表面触发受体的表达引入或增强；

(f)其中所述一种或多种添加剂包括：

(i)肽、抗体、抗体片段、细胞因子、有丝分裂原、生长因子、小RNA、dsRNA、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或置换因子、包含一种或多种所关注多聚核酸的载体、化学治疗剂或放射性部分、以及免疫调节药物(IMiD)中的至少一种；或

(ii)包括IL2、IL12、IL18以及IL21的刺激性细胞因子中的至少一种；

(g)其中所述组合物包含：

(i)TGFβ受体抑制剂、ROCK抑制剂、PDK1激动剂、以及雷帕霉素中的一种或多种；

(ii)所述GSK3抑制剂是CHIR99021；

(iv)IL15以及STING激动剂；或

(v)至少一种选自由以下组成的群组的有机溶剂：二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲氧基乙烷(DME)、二甲基乙酰胺、乙醇及其组合；

(h)其中所述经调节的免疫细胞或所述一种或多种期望的免疫细胞亚群在接触所述至少两种药剂后具有增加的数量或比例，所述经调节的免疫细胞或所述一种或多种期望的免疫细胞亚群包括：

(i)CD57+NK细胞或适应性NK细胞；

(ii)适应性NK细胞，其包含CD57+以及NKG2C+、低PLZF、低SYK、低FcεRγ、低EAT-2、低TIGIT、低PD1、低CD7、低CD161、高LILRB1、高CD45RO和低CD45RA中的至少一种；或

(iii)表达hnCD16的CD57+NK细胞；

其中所述经调节的免疫细胞或所述一种或多种期望的免疫细胞亚群任选地包含至少一种基因修饰形态；

(i)其中所述一种或多种期望的亚群从所述经调节的免疫细胞中分离；

(j)其中所述足够的时间不小于16小时；

(k)其中所述用于调节的免疫细胞处于无饲养细胞的环境中；

(l)其中所述经调节的NK细胞

(i)与未调节的NK细胞相比，对CD107a、NKG2C、以及NKp30中的一种或多种的表达增加，其中其表达增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多；

(ii)增加扩增至少2倍；和/或

(iii)具有改进的细胞因子响应，包含一种或多种细胞因子的产生的增加，所述细胞因子包含IFNγ和/或TNFα。